Effect of Compound <italic style="font-style: italic">Phylanthus urinaria</italic> Ⅱ in Regulating Expression of lncRNA CCAT1 in Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells

Li-wen CHEN; Qiao-min LI; Xiao-hui LI; Chang-qing LI

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20202123

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Effect of Compound Phylanthus urinaria Ⅱ in Regulating Expression of lncRNA CCAT1 in Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells

更新时间：2021-12-03

- Effect of Compound Phylanthus urinaria Ⅱ in Regulating Expression of lncRNA CCAT1 in Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 27, Issue 2, Pages: 74-79(2021)
- 作者机构：
  
  广州中医药大学，广州 510405
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20202123
  CLC： R22;R242;R2-031;R285.5
- Received：08 April 2020，
  
  Published Online：20 August 2020，
  
  Published：20 January 2021
- 稿件说明：
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陈力文,李俏敏,李小翚等.叶下珠复方Ⅱ号对肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1表达的调控作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(02):74-79.

CHEN Li-wen,LI Qiao-min,LI Xiao-hui,et al.Effect of Compound Phylanthus urinaria Ⅱ in Regulating Expression of lncRNA CCAT1 in Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(02):74-79.
陈力文,李俏敏,李小翚等.叶下珠复方Ⅱ号对肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1表达的调控作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(02):74-79. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20202123.

CHEN Li-wen,LI Qiao-min,LI Xiao-hui,et al.Effect of Compound Phylanthus urinaria Ⅱ in Regulating Expression of lncRNA CCAT1 in Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(02):74-79. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20202123.

摘要

目的

探讨叶下珠复方Ⅱ号通过抑制长链非编码RNA（lncRNA）结肠癌相关转录因子1（CCAT1）的表达，恢复小分子RNA let-7a（microRNA let-7a）的表达，从而发挥抗肝癌的作用机制。

方法

应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测正常肝细胞LO2与肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1的表达，比较2种细胞的表达差异。采用噻唑蓝（MTT）比色法测定肝癌HepG2在不同浓度的叶下珠复方Ⅱ号与5-氟尿嘧啶（5-FU）作用24，48，72 h后细胞增殖的情况。体外培养肝癌HepG2细胞，设空白组，叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6，0.8 g·L

-1

），应用Real-time PCR检测各组lncRNA CCAT1，microRNA let-7a和其靶基因高迁移率蛋白A2（HMGA2），N-RAS基因（N-RAS）mRNA表达改变；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HMGA2和细胞周期蛋白D

（Cyclin D

）的蛋白表达。

结果

与LO2细胞比较，肝癌HepG2细胞lncRNA CCAT1的表达明显上调（

0.05）。通过MTT比色实验测定出叶下珠复方Ⅱ号和5-FU作用于肝癌HepG2细胞的半数抑制浓度（IC

）分别为1.649，0.044 648 g·L

-1

；与空白组比较，叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6，0.8 g·L

-1

）均可抑制肝癌HepG2细胞增殖（

0.05），叶下珠复方Ⅱ号高质量浓度组（1.6 g·L

-1

）最为显著。Real-time PCR结果显示，与空白组比较，叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6，0.8 g·L

-1

）lncRNA CCAT1 的表达明显抑制（

0.05），高质量浓度组microRNA let-7a表达明显上调（

0.05），叶下珠复方Ⅱ高、低质量浓度组HMGA2 mRNA表达均明显下调，高质量浓度组N-RAS mRNA表达明显下调（

0.05）。Western blot结果表明，与空白组比较，叶下珠复方Ⅱ号高、低质量浓度组（1.6，0.8 g·L

-1

）的HMGA2，Cyclin D

蛋白表达均明显下调（

0.05）。

结论

叶下珠复方Ⅱ号可以通过抑制HepG2细胞lncRNA CCAT1表达，恢复microRNA let-7a表达，并抑制其下游相关靶基因的mRNA和蛋白表达，进而抑制肝癌细胞增殖，发挥抗肝癌作用。

Abstract

Objective

To explore the anti-hepatoma effect of compound

Phylanthus urinaria

Ⅱ （ CPU Ⅱ） by inhibiting the expression of the long non-coding RNA （lncRNA） colon cancer associated transcript-1 （CCAT1） and restoring the expression of microRNA let-7a.

Method

Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （PCR） was used to detect the expression of lncRNA CCAT1 in normal liver cells （LO2 cells） and hepatocellular carcinoma HepG2 cells， and the differences in expression between these two types of cells were compared. The methylthiazolyl tetrazolium（MTT） assay was used to detect the proliferation of HepG2 cells after treatment with different concentrations of CPU Ⅱ and 5-fluorouracil（5-FU） for 24， 48 and 72 h. Hepatocellular carcinoma HepG2 cells were cultured

in vitro

and set into three gropes： cell control group， CPU Ⅱ low-dose group （0.8 g·L

-1

） and high-dose group （1.6 g·L

-1

）. Real-time PCR was used to detect the mRNA expression of lncRNA CCAT1， microRNA let-7a and its target genes high mobility group protein A2（HMGA2）， and N-RAS in each grope. Western blot was used to detect the protein expression of HMGA2， and Cyclin D

in each grope.

Result

As compared with LO2 cells， expression of lncRNA CCAT1 in HepG2 cells was significantly up-regulated （

0.05）. Results of MTT assay showed that the 50% inhibiting concentration（IC

）

of CPU Ⅱ and 5-FU on hepatocellular carcinoma HepG2 cells was 1.649， 0.044 648 g·L

-1

respectively. As compared with the control group， CPU Ⅱ high-and low-dose groups （1.6， 0.8 g·L

-1

） significantly inhibited the proliferation of HepG2 cells （

0.05）， and the effect was most remarkable in CPU Ⅱ high-dose group （

0.05）. The results of Real-time PCR showed that as compared with control group， the expression of lncRNA CCAT1 mRNA was significantly inhibited in CPU Ⅱ high-and low-dose groups （

0.05）， and the expression of microRNA let-7a mRNA was obviously up-regulated in high-dose group （

0.05）， but the expression of HMGA2 mRNA in CPU Ⅱ high-and low-dose groups as well as the expression of N-RAS mRNA in CPU Ⅱ low-dose group were down-regulated （

0.05）. Western blot results showed that as compared with the cell control group， the protein expression of HMGA2 and Cyclin D

in CPU Ⅱ high-and low-dose groups （1.6， 0.8 g·L

-1

） was significantly down-regulated （

0.05）.

Conclusion

CPU Ⅱ can inhibit the expression of lncRNA CCAT1， recover the expression of microRNA let-7a， and suppress the mRNA and protein expression of related downstream target genes in hepatoma cells line HepG2， thereby inhibiting the proliferation of hepatocellular carcinoma cells and exerting anti-hepatocellular carcinoma effect.

关键词

Keywords

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Effect of Compound Phylanthus urinaria Ⅱ in Regulating Expression of lncRNA CCAT1 in Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cells

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20202123

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