Mechanism of Modified Si Junzitang on Neuronal Anti-anoikis of Cells in Rats with Cerebral Ischemia Through Fibulin-5 and p-Akt

Yan-yan CHEN; Hua LI; Wang-hua LIU; Bing-rong TANG; Yu-xiang LI; Hao-zhu WANG

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20210139

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Mechanism of Modified Si Junzitang on Neuronal Anti-anoikis of Cells in Rats with Cerebral Ischemia Through Fibulin-5 and p-Akt

更新时间：2021-12-03

- Mechanism of Modified Si Junzitang on Neuronal Anti-anoikis of Cells in Rats with Cerebral Ischemia Through Fibulin-5 and p-Akt
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 27, Issue 1, Pages: 112-120(2021)
- 作者机构：
  
  湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室，长沙 410208
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20210139
  CLC： R2-0;R289;R285.5;R246.6
- Received：26 July 2020，
  
  Published Online：09 November 2020，
  
  Published：05 January 2021
- 稿件说明：
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陈岩岩,李花,刘旺华等.加味四君子汤通过调控Fibulin-5，p-Akt表达抗脑缺血大鼠神经细胞失巢凋亡机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(01):112-120.

CHEN Yan-yan,LI Hua,LIU Wang-hua,et al.Mechanism of Modified Si Junzitang on Neuronal Anti-anoikis of Cells in Rats with Cerebral Ischemia Through Fibulin-5 and p-Akt[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(01):112-120.
陈岩岩,李花,刘旺华等.加味四君子汤通过调控Fibulin-5，p-Akt表达抗脑缺血大鼠神经细胞失巢凋亡机制[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(01):112-120. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210139.

CHEN Yan-yan,LI Hua,LIU Wang-hua,et al.Mechanism of Modified Si Junzitang on Neuronal Anti-anoikis of Cells in Rats with Cerebral Ischemia Through Fibulin-5 and p-Akt[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(01):112-120. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210139.

摘要

目的

探讨加味四君子汤对大鼠脑缺血再灌注（I/R）损伤后缺血侧海马区脑组织纤维蛋白-5（Fibulin-5），磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达及对神经细胞失巢凋亡的影响。

方法

将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉组（3.2 mg·kg

-1

），加味四君子汤高、中、低剂量组（19.08，9.54，4.77 g·kg

-1

）。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，7 d后处死大鼠，处死前进行神经功能缺损评分，采用苏木素-伊红（HE）染色进行组织病理学观察，原位末端标记法（TUNEL）染色检测神经细胞凋亡指数，免疫组化法和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺血侧海马区脑组织Fibulin-5及p-Akt蛋白表达情况。

结果

神经功能缺损评分结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高（

0.01）；与模型组比较，依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠神经功能缺损评分均明显降低（

0.05，

0.01）。免疫组化结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠Fibulin-5，p-Akt蛋白表达，神经细胞凋亡指数均明显增高（

0.05，

0.01）；与模型组比较，依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组大鼠Fibulin-5，p-Akt蛋白表达均明显增加（

0.05，

0.01），神经细胞凋亡指数均明显降低（

0.05，

0.01）。Western blot结果显示，与假手术组比较，模型组Fibulin-5，p-Akt蛋白相对表达显著下调（

0.01）；与模型组比较，依达拉奉组、加味四君子汤高、中、低剂量组Fibulin-5，p-Akt蛋白表达均明显上升（

0.05，

0.01）。

结论

加味四君子汤可能通过稳定神经元细胞外基质（ECM）Fibulin-5，从而增加了ECM对细胞的黏附作用，促进p-Akt蛋白的表达，从而抑制神经细胞凋亡，保护脑缺血损伤。

Abstract

Objective

To investigate the effect of modified Si Junzitang on the expression of fibrous protein-5（Fibulin-5）， phosphorylated protein kinase B（p-Akt ）in hippocampus of rats after cerebral ischemia-reperfusion （I/R） injury and the anoikis of nerve cells.

Method

The 60 male SD rats of SPF grade were randomly divided into sham operation group， model group， Edaravone group （3.2 mg·kg

-1

）and modified Si Junzitang high， medium and low-dose groups（19.08，9.54，4.77 g·kg

-1

）.The middle cerebral artery occlusion （MCAO） model was established by suture method，the rats were killed 7 days later，neurological deficit score was evaluated before the death，histopathological observation was performed by hematoxylin eosin staining， apoptosis index of nerve cells was detected by TdT-mediated dUTP nick end labeling（TUNEL）staining， the expression of Fibulin-5， p-Akt and protein in ischemic hippocampus were detected by immunohistochemistry and Western blot.

Result

The neurological deficit score showed that，compared with the sham operation group， the neurological deficit score of the model group was significantly increased （

0.01）， compared with model group， the neurological deficit score of Edaravone group，the high， medium， low dose groups of modified Si Junzitang were decreased （

0.05，

0.01）. Immunohistochemical results showed that，compared with the sham operation group， the expression of Fibulin-5， p-Akt protein and the apoptosis index of nerve cells in the model group were significantly increased （

0.05，

0.01）， compared with model group， the protein expressions of Fibulin-5 and p-Akt in Edaravone group， high， medium and low-dose groups of modified Si Junzitang were significantly increased （

0.05，

0.01）， and the apoptosis index of nerve cells was obvious，there was a significant decrease （

0.05，

0.01）. Western blot results showed that，compared with the sham operation group， the relative expression of Fibulin-5 and p-Akt protein in the model group was significantly down-regulated （

0.01）， compared with model group， the protein expressions of Fibulin-5 and p-Akt in the Edaravone group， the high， medium and low-dose groups of modified Si Junzitang were significantly up-regulated （

0.05，

0.01）.

Conclusion

The modified Si Junzitang may stabilize the extracellular matrix （ECM） Fibulin-5， increase the adhesion of ECM to cells and promote the expression of p-Akt protein， thus inhibiting neuronal apoptosis and protecting cerebral ischemia injury.

关键词

Keywords

references

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