Effect of Ginseng Radix et Rhizoma-Notoginseng Radix et Rhizoma-Chuanxiong Rhizoma Extract on HUVECs Senescence Mediated by Endothelial Microparticles

Bo-wen YU; Yan-hong HU; Jing YANG; Cheng-kui XIU; Xue WANG; Yan LEI

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20210506

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Effect of Ginseng Radix et Rhizoma-Notoginseng Radix et Rhizoma-Chuanxiong Rhizoma Extract on HUVECs Senescence Mediated by Endothelial Microparticles

Pharmacology | 更新时间：2021-03-29

- Effect of Ginseng Radix et Rhizoma-Notoginseng Radix et Rhizoma-Chuanxiong Rhizoma Extract on HUVECs Senescence Mediated by Endothelial Microparticles
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 27, Issue 8, Pages: 50-56(2021)
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院医学实验中心北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室，北京 100700
  2.中国中医科学院博士后科研流动站，北京 100700
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20210506
  CLC： R2-0;R22;R285.5
- Received：10 December 2020，
  
  Published Online：01 March 2021，
  
  Published：20 April 2021
- 稿件说明：
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于博文,胡艳红,杨静等.人参-三七-川芎提取物对内皮微粒介导HUVECs衰老的干预作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(08):50-56.

YU Bo-wen,HU Yan-hong,YANG Jing,et al.Effect of Ginseng Radix et Rhizoma-Notoginseng Radix et Rhizoma-Chuanxiong Rhizoma Extract on HUVECs Senescence Mediated by Endothelial Microparticles[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(08):50-56.
于博文,胡艳红,杨静等.人参-三七-川芎提取物对内皮微粒介导HUVECs衰老的干预作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(08):50-56. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210506.

YU Bo-wen,HU Yan-hong,YANG Jing,et al.Effect of Ginseng Radix et Rhizoma-Notoginseng Radix et Rhizoma-Chuanxiong Rhizoma Extract on HUVECs Senescence Mediated by Endothelial Microparticles[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(08):50-56. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20210506.

摘要

目的

观察人参-三七-川芎提取物对延缓内皮微粒（EMPs）诱导的血管内皮细胞衰老的影响，并探索其作用机制。

方法

以人脐静脉内皮细胞（HUVECs）为研究对象，复制性衰老10～12代细胞作为衰老模型，实验分为年轻组（2～4代细胞）、衰老组（10～12代细胞）、单纯EMPs干预组（提取衰老细胞产生的EMPs来干预年轻细胞）以及中药低、中、高剂量组（200，300，400 mg·L

-1

）。结合衰老相关

半乳糖苷酶（SA-

-gal）染色法和碘化丙啶（PI）单染法检测细胞周期来判断细胞衰老程度。采用细胞活性和细胞增殖检测（CCK-8）法筛选给药浓度，两步离心法分离出EMPs，藻红蛋白（PE） CD31抗体或异硫氰酸荧光素（FITC） Annexin V标记分离得到的EMPs，并用流式细胞术进行定量，2'，7'-二氯荧光素二乙酸酯（DCFDA）染色检测细胞内活性氧（ROS）水平。

结果

与衰老组比较，中药给药组可显著降低衰老细胞SA-

-gal活性（

0.01），使细胞周期S期阻滞得到恢复（

0.01），并降低衰老细胞分泌CD31

EMPs及Annexin V

EMPs的数量（

0.05）。与年轻组比较，单纯EMPs干预组可诱导年轻细胞SA-

-gal活性增强（

0.01），细胞周期阻滞于S期（

0.05），与衰老组比较，但在EMPs干预的同时给予中药干预后，可明显抑制EMPs介导增强的SA-

-gal活性（

0.05），并使S期阻滞得到恢复。中药组还可明显抑制EMPs诱导的细胞内ROS增高（

0.05，

0.01）。

结论

人参-三七-川芎提取物可通过影响EMPs延缓复制性血管内皮细胞衰老，其机制可能与抑制EMPs诱导的细胞内ROS水平增高有关。

Abstract

Objective

To investigate the effect of Ginseng Radix et Rhizoma-Notoginseng Radix et Rhizoma-Chuanxiong Rhizoma extract on endothelial microparticles （EMPs）-induced vascular endothelial cell senescence， and explore the possible mechanism.

Method

Human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） were used as the research objects， and the aged model was established with 10-12 passages of replicative senescence cells. The experimental cells were divided into young group （2-4 passage cells）， aged group （10-12 passage cells）， only EMPs intervention group （extract EMPs produced by aged cells to intervene young cells） and low dose， middle dose and high dose drug intervention groups （200， 300， 400 mg·L

-1

）. Senescence related

-galactosidase （SA-

-gal） staining and cell cycle propidium iodide （PI） staining were used to determine cell senescence. Cell counting kit-8 （CCK-8） assay was used to screen the drug concentration. EMPs were extracted by two-step centrifugation， EMPs labeled with phycoerythrin （PE） anti-human CD31 antibody or fluorescein isothiocyanate （FITC） annexin V were detected by flow cytometry， intracellular reactive oxygen species （ROS） were detected by 2'，7'- dichlorofluorescein diacetate （DCFDA） staining.

Result

After treatment with the drug， SA-

-gal activity of the aged cells significantly decreased （

0.01）， the S phase arrest was restored （

0.01）， and the number of CD31

EMPs and annexin V

EMPs secreted by aged cells decreased （

0.05）. Compared with the young group， only EMPs intervention group could induce increased SA-

-gal activity and S phase arrest in young cells （

0.05，

0.01）. However， after intervention of EMPs and the drug， EMPs-mediated increase of SA-

-gal activity was significantly inhibited and S phase arrest was restored （

0.05）. The increase of intracellular ROS induced by EMPs was also significantly inhibited by the drug （

0.05，

0.01）.

Conclusion

Ginseng Radix et Rhizoma-Notoginseng Radix et Rhizoma-Chuanxiong Rhizoma extract can delay the senescence of vascular endothelial cells by influencing EMPs， and the mechanism may be related to the inhibition of increased intracellular ROS induced by EMPs.

关键词

Keywords

references

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