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Regulation of Hypnotic Active Components of Cnidii Fructus on Melatonin Synthesis Rate-limiting Enzyme AANAT in Rats with PCPA-induced Insomnia
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 27, Issue 14, Pages: 47-52(2021)
- 作者机构：
山西省中医药研究院，太原 030012
- 作者简介：
- 基金信息：
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211309
CLC： R2-0;R22;R285.5;R289;R33Received：12 March 2021，
Published Online：24 May 2021，
Published：20 July 2021
- 稿件说明：
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郭晋良,仲启明,吉海杰等.探讨蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠褪黑素合成限速酶AANAT的调控作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(14):47-52.
GUO Jin-liang,ZHONG Qi-ming,JI Hai-jie,et al.Regulation of Hypnotic Active Components of Cnidii Fructus on Melatonin Synthesis Rate-limiting Enzyme AANAT in Rats with PCPA-induced Insomnia[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(14):47-52.
郭晋良,仲启明,吉海杰等.探讨蛇床子催眠活性组分对PCPA失眠大鼠褪黑素合成限速酶AANAT的调控作用[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(14):47-52. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211309.
GUO Jin-liang,ZHONG Qi-ming,JI Hai-jie,et al.Regulation of Hypnotic Active Components of Cnidii Fructus on Melatonin Synthesis Rate-limiting Enzyme AANAT in Rats with PCPA-induced Insomnia[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(14):47-52. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20211309.
摘要
目的
2
观察蛇床子催眠活性组分（CHC）对对氯苯丙氨酸（PCPA）失眠大鼠行为学、褪黑素（MT）合成限速酶芳基烷基胺
N
-乙酰基转移酶（AANAT）的影响，探讨其对松果体的保护机制。
方法
2
60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常、模型，MT阳性药，CHC高、中、低剂量6组，每组10只。除正常组其余各组腹腔注射4.5%PCPA混悬液，10 mL·kg
-1
，连续2 d，建立大鼠PCPA失眠模型。造模后正常及模型组灌胃等体积2%聚山梨酯-80，MT组（10 mg·kg
-1
），CHC高、中、低（60，30，15 mg·kg
-1
）给予10 mL·kg
-1
给药体积的药物，每日1次，连续7 d。给药4 d后分别进行旷场活动、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠试验，采用酶联免疫吸附法检测血清MT；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定松果体MT合成关键酶AANAT mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测松果体AANAT蛋白表达变化。
结果
2
与正常组比较，模型组大鼠旷场活动总距离、站立次数、中心区持续时间明显增加（
P
<
0.05，
P
<
0.01），高架开臂次数及时间比例下降（
P
<
0.05），入睡潜伏期显著延长（
P
<
0.01）；与模型组比较，低剂量组无明显差异，其余各组大鼠活动总距离均减少（
P
<
0.05，
P
<
0.01），高架开臂次数百分比升高（
P
<
0.05），入睡潜伏期缩短、睡眠时间明显延长（
P
<
0.05，
P
<
0.01）。与正常组比较，模型组MT含量显著下降（
P
<
0.01）；与模型组比较，低剂量组差异无明显统计学意义，其余各组血清MT不同程度的升高（
P
<
0.05）。与正常组比较，模型组AANAT mRNA表达量，AANAT蛋白表达量下降（
P
<
0.01）；与模型组比较，MT组，CHC高剂量组表达量明显增加（
P
<
0.05）。
结论
2
CHC改善PCPA失眠行为学指标、增加松果体细胞合成分泌MT，提高血清MT水平，与上调松果体AANAT mRNA及其蛋白的表达有关。
Abstract
Objective
2
To observe the effects of Cnidii Fructus hypnotic active components （CHC） on the behaviors of rats with p-chlorophenylalanine （PCPA）-induced insomnia and melatonin （MT） synthesis rate-limiting enzyme arylalkylamine
N
-acetyltransferase （AANAT）， and explore the protective mechanism of CHC on the pineal gland.
Method
2
Male SD rats of SPF grade were randomly divided into a blank control group， a model group， a MT group， and high-， medium-， and low-dose CHC groups with 10 rats in each group. Except for the blank control group， other groups received 4.5% PCPA suspension at 10 mL·kg
-1
， intragastric administration， for two consecutive days. After PCPA model of insomnia was established， normal and model groups were gavaged at the same volume of 2% Tween-80， MT control group （10 mg·kg
-1
）， CHC was high， medium and low （60， 30， 15 mg·kg
-1
）， 10 mL·kg
-1
， once a day， for consecutive 7 days. Four days after administration， open field， elevated cross maze， and pentobarbital sodium-induced sleep tests were conducted， respectively. Serum MT was detected by enzyme-linked immunosorbent assay. The mRNA expression level of AANAT was determined by real-time fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. The expression of AANAT protein in the pineal gland was detected by Western blot.
Result
2
Compared with the results in the blank control group， the total distance of open field activity and standing times and duration in the central area were increased （
P
<
0.05，
P
<
0.01）， the proportions of open arm entry （OE%） and open arm time （OT%） were decreased （
P
<
0.05）， and the sleep latency was prolonged （
P
<
0.01） in the model group. Compared with the model group， no significant difference was observed in the low-dose CHC group， while other groups exhibited reduced total distance of activity （
P
<
0.05，
P
<
0.01）， elevated OE% （
P
<
0.05）， shortened sleep latency， and prolonged sleep time （
P
<
0.05，
P
<
0.01）. Compared with the serum MT in the blank control group， that in the model group was decreased （
P
<
0.01）. Compared with the model group， no significant difference was observed in the low-dose CHC group， while other groups displayed increased serum MT （
P
<
0.05）. The mRNA and protein expression of AANAT was decreased in the model group as compared with that in the blank control group （
P
<
0.01）. Compared with the model group， the MT group and the high-dose CHC group showed up-regulated expression （
P
<
0.05）.
Conclusion
2
CHC improved the behavioral indexes of PCPA-induced insomnia， increased the synthesis and secretion of MT in pineal cells， and elevated the serum MT level， which was related to the up-regulation of the mRNA and protein expression of AANAT in the pineal gland.
关键词
Keywords
references
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