Effect of Tetramethylpyrazine on Vascular Mimicry of A549 Caner Stem-like Cell Under Hypoxia Environment

LIU Bin; LI Meng; HE Jie; YAN Xiaoru; ZHANG Peitong

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.202201721

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Effect of Tetramethylpyrazine on Vascular Mimicry of A549 Caner Stem-like Cell Under Hypoxia Environment

更新时间：2022-11-02

- Effect of Tetramethylpyrazine on Vascular Mimicry of A549 Caner Stem-like Cell Under Hypoxia Environment
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 23, Pages: 64-70(2022)
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院广安门医院，北京 100053
  2.北京中医药大学，北京 100029
  3.北京中医药大学东直门医院，北京 100700
  4.中国中医科学院西苑医院，北京 100091
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.202201721
  CLC： R22;R242;R2-031;R285.5
- Received：17 October 2021，
  
  Published Online：21 July 2022，
  
  Published：05 December 2022
- 稿件说明：
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刘槟,李蒙,何杰等.乏氧环境下川芎嗪对肺癌干细胞样细胞血管生成拟态的作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(23):64-70.

LIU Bin,LI Meng,HE Jie,et al.Effect of Tetramethylpyrazine on Vascular Mimicry of A549 Caner Stem-like Cell Under Hypoxia Environment[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(23):64-70.
刘槟,李蒙,何杰等.乏氧环境下川芎嗪对肺癌干细胞样细胞血管生成拟态的作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(23):64-70. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202201721.

LIU Bin,LI Meng,HE Jie,et al.Effect of Tetramethylpyrazine on Vascular Mimicry of A549 Caner Stem-like Cell Under Hypoxia Environment[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(23):64-70. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202201721.

摘要

目的

探讨乏氧状态下，川芎嗪（TMP）对非小细胞肺癌A549干细胞样细胞（CSLCs）血管生成拟态（VM）的作用，及TMP对肝细胞生长因子（HGF）/肝细胞生长因子受体（c-Met）蛋白表达的影响。

方法

应用无血清成球培养法分离富集A549 CSLCs，流式细胞术检测A549 CSLCs干细胞标志物CD44

/CD24

-/low

表达水平，使用CoCl

化学诱导乏氧模型。细胞活性与增殖检测（CCK-8）法检测（100、200、400、800、1 600、3 200 μmol·L

-1

）TMP对A549 CSLCs细胞活力的作用，选择对A549 CSLCs细胞活力无明显影响的低、中、高浓度（100、200、400 μmol·L

-1

）进行后续实验。小管形成实验检测不同浓度TMP对乏氧状态A549 CSLCs VM形成的作用，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同浓度TMP对乏氧状态CSLCs HGF/c-Met蛋白表达的影响。

结果

流式细胞术检测所分离富集CSLCs CD44

/CD24

-/low

表达比例为（80.3±0.21）%，与A549组比较显著升高（

0.01）；CCK-8法显示，与空白组比较，各浓度TMP组CSLCs抑制率不同程度上升，其中24 h TMP组（800、3 200 μmol·L

-1

）；48 h TMP组（1 600、3 200 μmol·L

-1

）CSLCs抑制率明显升高（

0.05）；小管形成实验结果显示，与空白组及贝伐珠单抗（Bev）组比较，各浓度TMP组小管结点、交叉点数显著下降（

0.01）；与SU11274组比较，TMP各组小管结点及交叉点数目减少，TMP组（200 μmol·L

-1

）小管交叉点数明显减少（

0.05）；TMP组（400 μmol·L

-1

）小管结点数及交叉点数显著减少（

0.01）。Western blot结果显示，与空白组比较，各浓度TMP组HGF、c-Met蛋白水平明显下调（

0.05，

0.01）。

结论

TMP能够在体外模型中抑制乏氧状态A549 CSLCs VM形成，可能通过调控HGF/ c-Met相关通路发挥作用。

Abstract

Objective

To explore the effect of tetramethylpyrazine （TMP） on the vascular mimicry （VM） of non-small cell lung cancer A549 stem cell-like cells （CSLCs） in hypoxic state， and on the expression of hepatocyte growth factor （HGF）/mesenchymal-epithelial transition factor （c-Met）.

Method

Serum-free sphere culture method was used to separate and enrich A549 CSLCs， and flow cytometry to detect the expression of stem cell marker CD44

/CD24

-/low

. CoCl

was employed to induce hypoxia model. Cell counting kit-8 （CCK-8） assay was employed to examine the influence of 100， 200， 400， 800， 1 600， and 3 200 μmol·L

-1

TMP on the viability of A549 CSLCs. The low， medium， and high concentration （100， 200， 400 μmol·L

-1

） of TMP that did not significantly affect the viability of A549 CSLCs was selected for subsequent experiments. Tube formation assay was used to detect the effect of different concentration of TMP on the formation of A549 CSLCs VM under hypoxia condition， and Western blot was applied to measure the expression of HGF/c-Met.

Result

The CD44

/CD24

-/low

expression ratio of the isolated and enriched CSLCs was （80.3±0.21）%， which was significantly higher than that of the A549 group （

0.01）. Compared with the control group， TMP groups showed increase in the inhibition rate of CSLCs， particularly the 24 h TMP （800， 3 200 μmol·L

-1

） groups and the 48 h TMP （1 600， 3 200 μmol·L

-1

） groups （

0.05）. Compared with blank group and Bevacizumab （Bev） group， each concentration of TMP decreased the number of tubes formed and intersections （

0.01）. The number of tubes formed and intersections decreased in TMP groups compared with that in the SU11274 group， particularly the 200 μmol·L

-1

TMP group （

0.05） and 400 μmol·L

-1

TMP group （

0.01）. Levels of HGF and c-Met in all TMP groups were down-regulated compared with those in the blank group （

0.05，

0.01）.

Conclusion

TMP can inhibit the formation of VM in A549 CSLCs

in vitro

under hypoxia condition which may act by regulating HGF/c-Met related signaling pathways.

关键词

Keywords

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