Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance

Qiao-zhi LI; Yuan-shu LIU; Zhen-tao WANG; Hong WU; Shun-yu LIU

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220206

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Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance

更新时间：2022-01-13

- Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 4, Pages: 26-33(2022)
- 作者机构：
  
  1.河南中医药大学，郑州 450046
  2.新密市中医院，河南新密 452370
  3.河南省中医院，郑州 450002
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220206
  CLC： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- Received：25 September 2021，
  
  Published Online：25 November 2021，
  
  Published：20 February 2022
- 稿件说明：
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李巧稚,刘嫄淑,王振涛等.基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):26-33.

LI Qiao-zhi,LIU Yuan-shu,WANG Zhen-tao,et al.Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):26-33.
李巧稚,刘嫄淑,王振涛等.基于Th17/Treg细胞平衡探讨抗纤益心方对自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(04):26-33. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220206.

LI Qiao-zhi,LIU Yuan-shu,WANG Zhen-tao,et al.Immunomodulatory Mechanism of Kangxian Yixin Prescriptions on Autoimmune Injury Mice Based on Th17/Treg Cell Balance[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(04):26-33. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220206.

摘要

目的

探讨抗纤益心方干预自身免疫损伤小鼠免疫调节的作用机制，及其与辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）细胞平衡的关系。

方法

将60只SPF级BALB/c健康8周龄雄性小鼠按1∶5的比例随机分为正常组和造模组，在第0，7，28天于造模组小鼠腹股沟、腋下、背部多处皮下注射猪心肌肌球蛋白乳化液0.2 mL（含猪心肌肌球蛋白0.1 mg）以制备心肌免疫损伤小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组，抗纤益心方组（KYP），缬沙坦组（Valsartan），抗纤益心方组给予抗纤益心方20.4 g·kg

-1

·d

-1

灌胃，缬沙坦组给予缬沙坦12 mg·kg

-1

·d

-1

灌胃，正常组和模型组给予同计算量的生理盐水灌胃，连续灌胃4周后取材，苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色检测心肌组织中病理损伤情况，酶联免疫吸附法检测小鼠血清中B型钠尿肽（BNP），抗心肌抗体，白细胞介素-17（IL-17）和白细胞介素-10（IL-10）的表达，流式细胞术检测脾脏Th17，Treg细胞的表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠心肌组织B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），Bcl-2蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠脾脏转录因子维A酸相关孤独受体

t（ROR

t），叉头框蛋白P3（FoxP3） mRNA表达。

结果

与正常组比较，模型组小鼠心肌病理损伤增加，血清BNP，抗心肌抗体，IL-17升高，IL-10降低（

0.05），脾脏Th17细胞表达水平升高，Treg细胞的表达水平降低（

0.05），心肌组织Bax蛋白表达升高，Bcl-2蛋白表达降低（

0.05），Bax/Bcl-2值升高，脾脏ROR

t mRNA表达升高，FoxP3 mRNA表达降低，ROR

t/FoxP3升高（

0.05）；与模型组比较，抗纤益心方组及缬沙坦组心肌病理损伤减轻，血清BNP，抗心肌抗体，IL-17降低，IL-10升高（

0.05），脾脏Th17细胞表达水平降低，Treg细胞的表达水平升高（

0.05），心肌组织Bax蛋白表达降低，Bcl-2蛋白表达升高（

0.05），Bax/Bcl-2降低，脾脏ROR

t mRNA表达降低，FoxP3 mRNA表达升高，ROR

t/FoxP3值降低（

0.05）。

结论

抗纤益心方可能通过调节Th17/Treg细胞平衡改善心肌免疫损伤。

Abstract

Objective

To investigate the immunomodulatory mechanism of Kangxian Yixin prescription （KYP） on autoimmune injury mice and its relationship with the T helper 17 （Th17）/regulatory T cell （Treg） balance.

Method

Sixty healthy 8-week-old male BALBc mice were randomly divided into a normal group and an experimental group at a ratio of 1∶5. On the 0

， 7

， and 28

days， 0.2 mL of porcine cardiac myosin emulsion （containing 0.1 mg of porcine cardiac myosin） was subcutaneously injected into the groin， armpit， and back of the mice in the experimental group to induce an animal model of myocardial immune injury. Mice with myocardial immune injury were randomly divided into a model group （Model）， a KYP group （20.4 g·kg

-1

·d

-1

，

）， and a valsartan group （12 mg·kg

-1

·d

-1

，

）. Mice in the control group and the model group received the same amount of normal saline by gavage. After four weeks of intervention， the heart tissues were collected. Hematoxylin-eosin （HE） staining and Masson staining were used to detect pathological damage in heart tissues. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect the expression of type B-type natriuretic peptide （BNP）， anti-cardiac antibody， interleukin-17 （IL-17）， and interleukin-10 （IL-10） in the serum of mice， and the expression levels of Th17 cells and Tregs in the spleen were detected by flow cytometry. The protein expression of B-cell lymphoma-2 （Bcl-2） and Bcl-2-associated X （Bax） in heart tissues was detected by Western blot， and the mRNA expression of retinoid-related orphan receptor gamma t （ROR

t） and forkhead box P3 （FoxP3） in the spleen was detected by quantitative real-time polymerase chain reaction （Real-time PCR）.

Result

Compared with the control group， the model group showed worsened pathological damage in heart tissues， elevated serum levels of BNP， anti-myocardial antibody， and IL-17， decreased serum expression of IL-10 （

0.05）， increased expression of Th17 cells and reduced expression of Tregs in spleen tissues （

0.05）， increased protein expression of Bax， diminished Bcl-2 protein expression， elevated Bax/Bcl-2 ratio， up-regulated mRNA expression of ROR

t， dwindled mRNA expression of FoxP3， and elevated ratio of ROR

t/FoxP3 （

0.05）. Compared with the model group， the KYP group and the valsartan group displayed relieved pathological damage in heart tissues， decreased serum expression of BNP， anti-myocardial antibody， and IL-17， increased serum expression of IL-10 （

0.05）， reduced expression of Th17 cells and increased Tregs in spleen tissues （

0.05）， dwindled protein expression of Bax and elevated protein expression of Bcl-2

in heart tissues （

0.05）， diminished Bax/Bcl-2 ratio， reduced mRNA expression of ROR

t， up-regulated FoxP3， and down-regulated ratio of ROR

t/FoxP3 （

0.05）.

Conclusion

KYP may improve myocardial immune damage by regulating the Th17/Treg cell balance.

关键词

Keywords

references

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