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Mechanism of Pachymic Acid in Inhibiting Invasion and Metastasis of Renal Carcinoma Cells via Regulating MMP/TIMP Balance by Smads
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 29, Issue 7, Pages: 76-83(2023)
- 作者机构：
扬州大学 医学院，国家中医药管理局胃癌毒邪论治重点研究室，扬州大学-扬州市肿瘤研究所， 江苏 扬州 225001
- 作者简介：
- 基金信息：
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.202202127
CLC： R22;R242;R2-031;R285.5Published：05 April 2023，
Published Online：13 September 2022，
Received：04 June 2022，
- 稿件说明：
扫 描 看 全 文
罗园园,冯心怡,褚泽文等.茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(07):76-83.
LUO Yuanyuan,FENG Xinyi,CHU Zewen,et al.Mechanism of Pachymic Acid in Inhibiting Invasion and Metastasis of Renal Carcinoma Cells via Regulating MMP/TIMP Balance by Smads[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(07):76-83.
罗园园,冯心怡,褚泽文等.茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(07):76-83. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202202127.
LUO Yuanyuan,FENG Xinyi,CHU Zewen,et al.Mechanism of Pachymic Acid in Inhibiting Invasion and Metastasis of Renal Carcinoma Cells via Regulating MMP/TIMP Balance by Smads[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(07):76-83. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202202127.
摘要
目的
2
探讨茯苓中的三萜类化合物茯苓酸（PA），对肾癌侵袭转移的作用及机制。
方法
2
采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）试剂盒检测PA（0、20、40、80、160 μmol·L
-1
）对细胞存活率的影响，并筛选PA浓度用于后续实验。采用克隆形成实验评估PA（0、20、40、80 μmol·L
-1
）对细胞增殖的作用。细胞黏附实验用来观察PA（0、20、40、80 μmol·L
-1
）对细胞黏附能力的效果。划痕实验和Transwell侵袭实验用来检测PA（0、20、40、80 μmol·L
-1
）对细胞侵袭转移的影响。高内涵成像技术进一步动态观察和验证PA（0、20、40、80 μmol·L
-1
）对细胞运动的抑制作用。PA（0、20、40、80 μmol·L
-1
）对细胞中侵袭转移相关蛋白基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子（MMP/TIMP）和相关通路关键蛋白Smads表达的影响通过蛋白免疫印迹法（Western blot）来检测。
结果
2
CCK-8结果显示，与空白组比较，PA组细胞存活率显著降低（
P
<
0.01），24 h时PA对ACHN细胞的半数抑制浓度（IC
50
）为70.42 μmol·L
-1
。克隆形成实验显示，与空白组比较，PA组细胞克隆群数目显著减少（
P
<
0.01）。细胞黏附实验显示，与空白组比较，PA组细胞的黏附数量显著减少（
P
<
0.01）。划痕实验表明，与空白组比较，PA组细胞的划痕愈合率降低（
P
<
0.05，
P
<
0.01）。Transwell侵袭实验显示，与空白组比较，PA组细胞的穿膜数量减少（
P
<
0.01）。高内涵成像技术表明，与空白组比较，PA组细胞累计迁移距离更短（
P
<
0.01）。Western blot结果表明，与空白组比较，PA组MMP-2、MMP-9蛋白的表达降低（
P
<
0.01），TIMP-1蛋白的表达升高（
P
<
0.01）。此外，与空白组比较，PA组Smad2、Smad3蛋白的表达降低（
P
<
0.01）。
结论
2
PA可抑制肾癌细胞的增殖、侵袭转移，其机制可能是通过Smad2/3调控MMP/TIMP的稳态平衡。
Abstract
Objective
2
To investigate the effect and mechanism of pachymic acid （PA） in Poria on the invasion and metastasis of renal carcinoma cells.
Method
2
The effect of PA （0， 20， 40， 80， 160 μmol·L
-1
） on cell viability was detected by cell counting kit-8（CCK-8）， and the dose of PA was selected for subsequent experiments. The effect of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L
-1
） on cell proliferation was evaluated by colony formation assay. The effect of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L
-1
） on cell adhesion ability was observed by cell adhesion assay. The effect of PA （0， 20， 40， and 80 μmol·L
-1
） on cell invasion and metastasis was investigated by Wound healing assay and Transwell invasion assay. The inhibitory effect of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L
-1
） on cell motility was further observed and verified by high-content imaging technology. The effects of PA （0， 20， 40， 80 μmol·L
-1
） on the expression of matrix metalloproteinase （MMP）/tissue inhibitor of metalloproteinasas （TIMP） related to invasion and metastasis and Smads were detected by Western blot.
Result
2
CCK-8 results showed that compared with the blank group， the PA groups showed decreased cell viability（
P
<
0.01）， with the half-maximal inhibitory concentration （IC
50
） of ACHN cells of 70.42 μmol·L
-1
at 24 h. Colony formation assay showed that the number of cell clonal groups in the PA groups was reduced compared with that in the blank group（
P
<
0.01）. Cell adhesion assay showed that compared with the blank group， the PA groups displayed reduced cell adhesion（
P
<
0.01）. Wound healing assay showed that the wound healing rate of cells in the PA groups was lower than that in the blank group （
P
<
0.05，
P
<
0.01）. Transwell invasion assay showed that compared with the blank group， the number of transmembrane cells in PA groups was reduced（
P
<
0.01）. High-content imaging showed that the cumulative migration distance of cells in the PA groups was shorter than that in the blank group（
P
<
0.01）. The results of Western blot showed that the protein expression of MMP-2 and MMP-9 in the PA groups decreased （
P
<
0.01）， and TIMP-1 protein expression increased （
P
<
0.01） compared with those in the blank group. In addition， compared with the blank group， the PA groups showed decreased protein expression of Smad2 and Smad3 （
P
<
0.01）.
Conclusion
2
PA can inhibit the invasion and metastasis of renal carcinoma cells presumably through regulating the homeostasis of MMP/TIMP by Smad2/3.
关键词
茯苓酸肾癌基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子（MMP/TIMP）Smad2/3侵袭和迁移
Keywords
pachymic acidrenal carcinomamatrix metalloproteinase/tissue inhibitor of metalloproteinasas（MMP/TIMP）Smad2/3invasion and metastasis
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