Anti-tumor Effect and Mechanism of <italic style="font-style: italic">Lycopus lucidus</italic> Polysaccharide on Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells

Ting-ting CHENG; Yan LI; Gui-yuan CHEN

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220221

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Anti-tumor Effect and Mechanism of Lycopus lucidus Polysaccharide on Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells

更新时间：2021-12-31

- Anti-tumor Effect and Mechanism of Lycopus lucidus Polysaccharide on Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 3, Pages: 83-90(2022)
- 作者机构：
  
  1.大理大学基础医学院，云南大理 671000
  2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理 671000
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220221
  CLC： R22;R242;R2-031;R285.5;R34
- Received：20 July 2021，
  
  Published Online：15 November 2021，
  
  Published：05 February 2022
- 稿件说明：
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程婷婷,李岩,陈贵元.地参多糖对非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤作用及机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(03):83-90.

CHENG Ting-ting,LI Yan,CHEN Gui-yuan.Anti-tumor Effect and Mechanism of Lycopus lucidus Polysaccharide on Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(03):83-90.
程婷婷,李岩,陈贵元.地参多糖对非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤作用及机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(03):83-90. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220221.

CHENG Ting-ting,LI Yan,CHEN Gui-yuan.Anti-tumor Effect and Mechanism of Lycopus lucidus Polysaccharide on Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(03):83-90. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220221.

摘要

目的

观察地参多糖（LLP）的体外抗肿瘤活性及机制。

方法

细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测LLP（0，5，10，15，20 g·L

-1

）对A549细胞不同作用时间（24，48，72 h）的增殖抑制作用；采用细胞划痕，transwell实验检测LLP（10，20 g·L

-1

）作用24，48 h后A549细胞的迁移侵袭能力；碘化丙啶（PI）单染法检测LLP（10，20 g·L

-1

）对A549细胞周期的影响；异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/PI凋亡试剂盒检测LLP（10，20 g·L

-1

）诱导A549细胞的凋亡作用；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测LLP（10，20 g·L

-1

）对A549细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3），半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8（Caspase-8），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9），细胞周期依赖性激酶-1（CDK-1），细胞周期蛋白B

（Cyclin B

） mRNA表达的影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测LLP对A549细胞中Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9，B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），CDK-1，细胞周期依赖性激酶4（CDK-4），细胞周期依赖性激酶-6（CDK-6），Cyclin B

，细胞周期蛋白D

（Cyclin D

）蛋白表达的影响。

结果

与空白组比较，LLP组A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低（

0.05，

0.01）；DNA合成准备期/DNA合成前期（G

期）比例升高（

0.05）；凋亡率升高（

0.05，

0.01）；Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9 mRNA表达水平升高（

0.05，

0.01），CDK-1，Cyclin B

mRNA表达水平降低（

0.05，

0.01）；Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9，Bax蛋白表达水平升高（

0.05，

0.01），Bcl-2，CDK-1，CDK-4，CDK-6，Cyclin B

，Cyclin D

蛋白表达水平降低（

0.05，

0.01）。

结论

LLP可抑制A549细胞的增殖，使其周期阻滞在G

期，同时可能包含DNA合成后期/DNA分裂期（G

/M期），并通过线粒体凋亡途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡。

Abstract

Objective

To study the anti-tumor activity and mechanism of

Lycopus lucidus

polysaccharide （LLP）

in vitro

Method

Cell counting kit-8 （CCK-8） assay was used to detect the inhibitory effect of LLP （0， 5， 10， 15， 20 g·L

-1

） on the proliferation of A549 cells at different time points （24，48，72 h）. The migration and invasion abilities of A549 cells were detected by wound healing assay and transwell assay after LLP （10， 20 g·L

-1

） treatment for 24，48 h. Propidium iodide （PI） single staining was applied to determine the effect of LLP of different concentrations （10，20 g·L

-1

） on the cell cycle of A549. The apoptosis of A549 cells induced by LLP （10， 20 g·L

-1

） was detected by Annexin V-FITC/PI kit. Real-time fluorescence-based quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） was adopted to measure effect of LLP （10， 20 g·L

-1

） on gene expression of cysteine aspartate protease-3 （Caspase-3），cysteine aspartate protease-8 （Caspase-8），cysteine aspartate protease-9 （Caspase-9），cyclin-dependent kinase-1 （CDK-1）， and Cyclin B

in A549 cells. Western blot was used to detect the effect of LLP on protein expression of Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9，B-cell lymphoma 2 （Bcl-2）-associated X protein （Bax），CDK-1，cyclin-dependent kinase-4 （CDK-4），cyclin-dependent kinase-6 （CDK-6），Cyclin B

，and Cyclin D

in A549 cells.

Result

Compared with the blank group， the LLP group showed decreased proliferation， migration， and invasion of A549 cells （

0.05，

0.01）， increased proportion of G

phase （

0.05）， enhanced apoptosis rate （

0.05，

0.01）， elevated mRNA expression of Caspase-3，Caspase-8，and Caspase-9 （

0.05，

0.01）， reduced mRNA expression of CDK-1 and Cyclin B

（

0.05，

0.01）， up-regulated protein expression of Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9， and Bax （

0.05，

0.01）， and down-regulated protein expression of Bcl-2， CDK-1， CDK-4， CDK-6， Cyclin B

， and Cyclin D

（

0.05，

0.01）.

Conclusion

LLP can inhibit the proliferation of A549 cells， block the cell cycle in the G

phase （also G

/M phase）， and induce cell apoptosis via the mitochondrial apoptosis pathway and death receptor pathway.

关键词

Keywords

references

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Anti-tumor Effect and Mechanism of Lycopus lucidus Polysaccharide on Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells

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