Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking

ZOU Zhao; LI Jiashan; XU Ying; YANG Yibo; XU Panyu; DU Hanqian; ZHU Weifeng; LIN Na

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220353

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Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking

更新时间：2022-10-18

- Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking
  增强出版
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 22, Pages: 159-166(2022)
- 作者机构：
  
  1.江西中医药大学，南昌 330004
  2.中国中医科学院中药研究所，北京 100700
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220353
  CLC： R22;R28;R969.1;O657
- Received：13 December 2021，
  
  Published Online：26 February 2022，
  
  Published：20 November 2022
- 稿件说明：
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邹钊,李佳珊,徐颖等.基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):159-166.

ZOU Zhao,LI Jiashan,XU Ying,et al.Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):159-166.
邹钊,李佳珊,徐颖等.基于UPLC-Q-Orbitrap-MS和分子对接技术的青盐方药效物质基础分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(22):159-166. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220353.

ZOU Zhao,LI Jiashan,XU Ying,et al.Analysis of Pharmacodynamic Material Basis of Qingyan Formula Based on UPLC-Q-Orbitrap-MS and Molecular Docking[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(22):159-166. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220353.

摘要

目的

采用血清药物化学方法研究青盐方的入血成分，并考察入血成分与雌激素受体（ER）的结合能，确认青盐方在大鼠体内的药效物质基础。

方法

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS）比较青盐方70%乙醇提取物、各单味药70%乙醇提取物、空白血清、青盐方70%乙醇提取物给药后血清的指纹图谱差异，根据质谱的保留时间、相对分子质量，以及一级、二级离子碎片，判定青盐方在大鼠体内的入血成分，流动相选择0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~5 min，2%~20%B；5~10 min，20%~50%B；10~15 min，50%~80%B；15~25 min，80%~95%B；25~26 min，95%~2%B；26~30 min，2%B），流速0.3 mL·min

-1

，进样量5 μL，电喷雾离子源，检测范围

150~2 000，正、负离子扫描模式。采用分子对接技术表征入血成分与ER

、ER

的结合能，进一步确认青盐方药效物质基础。

结果

口服青盐方后，从血清中检测出30种入血成分，其中9种为原型成分，21种为代谢产物。经鉴定9种原型成分分别为水晶兰苷、车叶草苷、麦角甾苷、松果菊苷、

-蜕皮甾酮、尿囊素、去乙酰基车叶草苷酸、甜菜碱、咖啡酸，21种代谢产物包括有机酸、氨基酸、胆碱类等。上述9种原型成分与ER

的结合能分别为-6.7、-8.9、-6.0、-5.7、-5.3、-4.9、-7.3、-3.3、-6.3 kcal·mol

-1

（1 kcal≈4 184 J），与ER

的结合能分别为-6.6、-7.2、-7.7、8.0、-7.4、-5.5、-6.9、-3.6、-6.4 kcal·mol

-1

。

结论

水晶兰苷等9种入血的原型成分是青盐方在体内发挥雌激素样作用的活性成分，可为该方质量标准的制定及后续研发提供实验依据。

Abstract

Objective

To study the constituents migrating to blood of Qingyan formula by serum pharmacochemistry， and investigate the binding energy between these constituents and estrogen receptor （ER）， so as to confirm the pharmacodynamic material basis of Qingyan formula in rats.

Method

Ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole electrostatic field-orbital trap high resolution mass spectrometry （UPLC-Q-Orbitrap-MS） was used to determine the constituents migrating to blood of Qingyan formula in rats by comparing the fingerprint differences of 70% ethanol extract of Qingyan formula， 70% ethanol extract of each single drug in this formula， blank serum and serum after administration of 70% ethanol extract of Qingyan formula， according to the retention time， relative molecular weight and the primary and secondary ion fragments provided by MS. Mobile phase was 0.1% formic acid aqueous solution （A）-acetonitrile（B） for gradient elution （0-5 min， 2%-20%B； 5-10 min； 20%-50%B； 10-15 min， 50%-80%B； 15-25 min， 80%-95%B； 25-26 min， 95%-2%B； 26-30 min， 2%B）， the flow rate was 0.3 mL·min

-1

and the injection volume was 5 μL， electrospray ionization was used with detection range of

150-2 000， positive and negative ion scanning modes. Molecular docking technology was used to characterize the binding energy of constituents migrating to blood with ER

and ER

， and to confirm the material basis of this formula.

Result

After oral administration of Qingyan formula， 30 components were detected in serum， of which 9 were prototype components and 21 were metabolites. Nine prototype components were identified as monotropein， asperuloside， verbascoside，

-ecdysone， allantoin， deacetyl asperuloside acid， echinacoside， betaine and caffeic acid， 21 metabolites mainly included organic acids， amino acids， cholines and so on. The binding energies of the above 9 prototype components with ER

were -6.7， -8.9， -6.0， -5.7， -5.3， -4.9， -7.3， -3.3， -6.3 kcal·mol

-1

（1 kcal≈4 184 J）， and the binding energies of them with ER

were -6.6， -7.2， -7.7， 8.0， -7.4， -5.5， -6.9， -3.6， -6.4 kcal·mol

-1

， respectively.

Conclusion

These nine prototype components into blood are the active ingredients of Qingyan formula that play estrogen-like role in the body， which can provide experimental basis for the formulation of quality standards and subsequent research and development of Qingyan formula.

关键词

Keywords

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