Mechanism of Tingli Dazao Xiefeitang on Cell Pyrolysis and Apoptosis Induced by Caspase-1 in A549 Cells

Jian-wei JIAO; Yu-jie BAI; Yu-lian BAI; Yan-jing ZHANG; Ping JIAO

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220636

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Mechanism of Tingli Dazao Xiefeitang on Cell Pyrolysis and Apoptosis Induced by Caspase-1 in A549 Cells

更新时间：2022-02-15

- Mechanism of Tingli Dazao Xiefeitang on Cell Pyrolysis and Apoptosis Induced by Caspase-1 in A549 Cells
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 6, Pages: 54-61(2022)
- 作者机构：
  
  1.河北省中医院，石家庄 050011
  2.武警河北总队医院，石家庄 050050
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220636
  CLC： R2-0;R285;R33
- Received：24 June 2021，
  
  Published Online：20 January 2022，
  
  Published：20 March 2022
- 稿件说明：
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焦建玮,白玉杰,白玉莲等.葶苈大枣泻肺汤通过Caspase-1诱导A549细胞焦亡与凋亡的机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(06):54-61.

JIAO Jian-wei,BAI Yu-jie,BAI Yu-lian,et al.Mechanism of Tingli Dazao Xiefeitang on Cell Pyrolysis and Apoptosis Induced by Caspase-1 in A549 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(06):54-61.
焦建玮,白玉杰,白玉莲等.葶苈大枣泻肺汤通过Caspase-1诱导A549细胞焦亡与凋亡的机制[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(06):54-61. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220636.

JIAO Jian-wei,BAI Yu-jie,BAI Yu-lian,et al.Mechanism of Tingli Dazao Xiefeitang on Cell Pyrolysis and Apoptosis Induced by Caspase-1 in A549 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(06):54-61. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220636.

摘要

目的

探讨葶苈大枣泻肺汤诱导A549细胞焦亡和凋亡的机制。

方法

将A549细胞随机分为空白组、葶苈大枣泻肺汤低、中、高质量浓度组（中药低、中、高质量浓度组），中药低、中、高质量浓度组分别以葶苈大枣泻肺汤20、40、60 mg·L

-1

处理，空白组以等体积培养液处理。药物作用48 h后，划痕实验检测细胞迁移能力，流式细胞仪检测细胞凋亡，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、消皮素D（GSDMD）、细胞凋亡抑制因子（Survivin）蛋白及核转录因子-

B（NF-

B）通路蛋白相对表达量，DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧（ROS）水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞上清液肿瘤坏死因子-

（TNF-

）和白细胞介素-1

（IL-1

）含量。

结果

与空白组比较，中药低、中、高质量浓度组细胞划痕愈合率明显降低，细胞凋亡率明显增加，Survivin蛋白相对表达量明显降低，Caspase-1、GSDMD、NLRP3相对表达量明显增加，ROS和NF-

B磷酸化水平明显上升，细胞上清液TNF-

和IL-1

含量明显增加（

0.05）；与中药低质量浓度组比较，中药中、高质量浓度组细胞划痕愈合率明显降低，细胞凋亡率明显增加，Survivin蛋白相对表达量明显降低，Caspase-1、GSDMD、NLRP3相对表达量明显增加，ROS和NF-

B磷酸化水平明显上升，细胞上清液TNF-

和IL-1

含量明显增加（

0.05）；与中药中质量浓度组比较，中药高质量浓度组细胞划痕愈合率明显降低，细胞凋亡率明显增加，Survivin蛋白相对表达量明显降低，Caspase-1、GSDMD、NLRP3相对表达量明显增加，ROS和NF-

B磷酸化水平明显上升，细胞上清液TNF-

和IL-1

含量明显增加（

0.05）。

结论

葶苈大枣泻肺汤可提高NLRP3蛋白表达，抑制Survivin蛋白表达，促进A549细胞凋亡；同时，可激活NF-

B通路和ROS系统，上调细胞焦亡因子Caspase-1，GSDMD的表达，介导A549细胞焦亡。

Abstract

Objective

To explore the mechanism of coking death and apoptosis of A549 cells induced by Tingli Dazao Xiefeitang.

Method

A549 cells were randomized into blank group， traditional Chinese medicine（TCM） low， medium， and high concentration groups， which were treated with 20， 40， 60 mg·L

-1

Tingli Dazao Xiefeitang， and TCM low， medium， and high concentration groups， respectively， and blank group was treated with equal volume culture medium. After 48 h of treatment， cell migration was detected by scratch assay and cell apoptosis was detected by flow cytometry. The relative expression levels of cysteine aspartate protease-1（Caspase-1）， NOD-like receptor protein 3 （NLRP3）， dermoderin D （GSDMD）， Survivin protein and nuclear transcription factor -

B （NF-

B） pathway proteins were detected by Western blot. The levels of intracellular reactive oxygen species （ROS） were determined by DCFH-DA fluorescence probe， and the contents of tumor necrosis factor -

（TNF-

） and interleukin-1

（IL-1

） in supernatant were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.

Result

Compared with blank group， the scratch healing rate， apoptosis rate， relative expression of Survivin protein， Caspase-1， GSDMD， NLRP3， ROS and NF-

B phosphorylation levels were significantly increased in low， medium and high concentration groups. The contents of TNF-

and IL-1

in supernatant were significantly increased （

0.05）. Compared with the low concentration group， the scratch healing rate， apoptosis rate， Survivin protein relative expression， Caspase-1， GSDMD， NLRP3 relative expression， ROS and NF-

B phosphorylation levels were significantly increased in the medium and high concentration groups. The contents of TNF-

and IL-1

in supernatant were significantly increased （

0.05）. Compared with the TCM group， the scratch healing rate， apoptosis rate， Survivin protein relative expression， Caspase-1， GSDMD， NLRP3 relative expression， ROS and NF-

B phosphorylation levels were significantly increased in the high concentration group. The contents of TNF-

and IL-1

in supernatant were significantly increased （

0.05）.

Conclusion

Tingli Dazao Xiefeitang can improve NLRP3 protein expression， inhibit Survivin protein expression and promote apoptosis of A549 cells. At the same time， it can activate NF-

B pathway and ROS system， up-regulate the expression of Caspase-1 and GSDMD， mediate scortosis of A549 cells.

关键词

Keywords

references

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