Systematic Effect of Modified Renshen Wumeitang in Regulation of GABA Signaling Pathway in Rats with Diarrhea

LI Shan-shan; ZHAO Qiong; GUAN Zhi-wei; ZHOU Hong-yun; LIU Qian-wei; HUANG Qin-wan; ZHAO Meng-jie

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220908

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Systematic Effect of Modified Renshen Wumeitang in Regulation of GABA Signaling Pathway in Rats with Diarrhea

更新时间：2023-05-17

- Systematic Effect of Modified Renshen Wumeitang in Regulation of GABA Signaling Pathway in Rats with Diarrhea
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 9, Pages: 59-65(2022)
- 作者机构：
  
  1.成都中医药大学临床医学院/附属医院，成都 610075
  2.河南中医药大学第一附属医院，郑州 450000
  3.北京中医药大学，北京 100029
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220908
  CLC： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- Received：29 December 2021，
  
  Published Online：09 March 2022，
  
  Published：05 May 2022
- 稿件说明：
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李珊珊,赵琼,管志伟等.加味人参乌梅汤调控腹泻大鼠GABA能信号通路的系统效应[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(09):59-65.

LI Shan-shan,ZHAO Qiong,GUAN Zhi-wei,et al.Systematic Effect of Modified Renshen Wumeitang in Regulation of GABA Signaling Pathway in Rats with Diarrhea[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(09):59-65.
李珊珊,赵琼,管志伟等.加味人参乌梅汤调控腹泻大鼠GABA能信号通路的系统效应[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(09):59-65. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220908.

LI Shan-shan,ZHAO Qiong,GUAN Zhi-wei,et al.Systematic Effect of Modified Renshen Wumeitang in Regulation of GABA Signaling Pathway in Rats with Diarrhea[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(09):59-65. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220908.

摘要

目的

研究加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠结肠组织中

-氨基丁酸（GABA）能信号通路相关调控因子的影响，进一步揭示加味人参乌梅汤益气生津止泻的作用机制。

方法

从48只SD幼龄大鼠中随机抽取12只作为正常组，其余大鼠以番泻叶泻下、劳倦力竭及饮食失宜等复合因素造模14 d。造模成功后，随机分为模型组、西药组及中药组，每组12只。正常组与模型组给予生理盐水灌胃（20 mL·kg

-1

），西药组给予妈咪爱灌胃（0.7 g·kg

-1

），中药组给予加味人参乌梅汤灌胃（35 g·kg

-1

），均1次/d，连续干预7 d。每日观测记录大鼠一般情况、稀便率及腹泻指数。获取大鼠结肠标本，采用免疫组化法（IHC）检测大鼠结肠GABA蛋白积分吸光度表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B2（Akt2）、磷酸化（p-）Akt及白细胞介素-1

（IL-1

）的含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠结肠PI3K、Akt2及

-氨基丁酸A型受体

亚基（GABRB2） mRNA和蛋白的表达水平。

结果

与正常组比较，模型组大鼠一般情况明显变差，稀便率及腹泻指数差异无统计学意义，GABA蛋白表达明显升高（

0.05），PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1

表达含量明显升高（

0.05，

0.01），PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA及蛋白表达均极显著升高（

0.01）。与模型组比较，中药组、西药组大鼠一般情况明显好转，稀便率及腹泻指数显著下调（

0.01），中药组、西药组PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1

含量均明显下调（

0.05），中药组PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA均明显下调（

0.05，

0.01），GABA、PI3K及GABRB2蛋白表达明显下调（

0.05，

0.01）；西药组PI3K及Akt2 mRNA和PI3K蛋白表达均明显下降（

0.05）。

结论

加味人参乌梅汤能通过调节腹泻大鼠结肠GABA能信号通路，减少肠上皮细胞中Cl

向肠腔流动，改善腹泻模型大鼠结肠水液代谢失衡状态，进而发挥其益气生津止泻效应。

Abstract

Objective

To investigate the effect of modified Renshen Wumeitang（MRWT） on the related regulatory factors of the

-aminobutyric acid （GABA） signaling pathway in colon tissues of rats with diarrhea， and reveal the mechanism of MRWT in invigorating Qi， generating fluid， and checking diarrhea.

Method

Forty-eight SD immature rats were randomly divided into a blank group （

=12） and an experimental group （

=36）. The diarrhea model was induced in the experimental group by Sennae Folium combined with overstrain and improper diet for 14 days. Subsequently， the model rats were randomly divided into a model group （normal saline， 20 mL

-1

）， a western medicine group （Medilac-Vita， 0.7 g

-1

）， and a Chinese medicine group （MRWT， 35 g

-1

）， with 12 rats in each group. The rats in the blank group received normal saline at 20 mL

-1

， and those in the other groups were treated correspondingly， once a day for 7 days. The general condition， loose stool rate， and diarrhea index of the rats were observed daily. Immunohistochemistry was used to detect the optical density expression of GABA protein in the colon of rats. The content of phosphatidylinositol-3 kinase （PI3K）， protein kinase B2 （Akt2）， phosphorylated Akt （p-Akt）， and interleukin-1

（IL-1

） was determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The mRNA and protein expression levels of PI3K， Akt2， and GABA type A receptor subunit

（GABRB2） in the colon of rats were detected by Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） and Western blot， respectively.

Result

Compared with the blank group， the model group showed worsened general condition， The difference was not statistically significant of loose stool rate and diarrhea index， increased expression of GABA protein （

0.05）， elevated expression of PI3K， Akt2， p-Akt， and IL-1

（

0.05，

0.01）， and up-regulated PI3K， Akt2， and GABRB2 mRNA and protein expression （

0.01）. Compared with the model group， the western medicine group and the Chinese medicine group showed the improved general condition， decreased loose stool rate and diarrhea index （

0.01）， and decreased content of PI3K， Akt2， p-Akt， and IL-1

（

0.05）. The Chinese medicine group displayed decreased mRNA expression of PI3K， Akt2， and GABRB2 （

0.05，

0.01） and down-regulated protein expression of GABA， PI3K， and GABRB2 （

0.05，

0.01）. The western medicine group exhibited down-regulated mRNA expression of PI3K，Akt2，and protein of PI3K （

0.05）.

Conclusion

MRWT can regulate the GABA signaling pathway， reduce Cl

flow in intestinal epithelial cells to the intestinal lumen， and improve the imbalance of colonic fluid metabolism in the colon of diarrhea rats， thereby exerting its effects of invigorating qi， generating fluid， and checking diarrhea.

关键词

Keywords

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