Identification of Murrayae Folium et Cacumen by Multiplex Allele-Specific PCR

Ziyuan CHEN; Yuyang ZHAO; Xutao XIE; Wenbo XIE; Yan JIN; Chao JIANG; Yuan YUAN

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221012

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Identification of Murrayae Folium et Cacumen by Multiplex Allele-Specific PCR

更新时间：2022-08-05

- Identification of Murrayae Folium et Cacumen by Multiplex Allele-Specific PCR
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 17, Pages: 106-112(2022)
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地，北京 100700
  2.华润三九医药股份有限公司，广东深圳 518029
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221012
  CLC： R284.2;R289;R22;R2-031;R33
- Received：22 January 2022，
  
  Published Online：17 June 2022，
  
  Published：05 September 2022
- 稿件说明：
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陈梓媛,赵玉洋,谢旭桃等.多基原九里香药材的多重位点特异性PCR鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(17):106-112.

CHEN Ziyuan,ZHAO Yuyang,XIE Xutao,et al.Identification of Murrayae Folium et Cacumen by Multiplex Allele-Specific PCR[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(17):106-112.
陈梓媛,赵玉洋,谢旭桃等.多基原九里香药材的多重位点特异性PCR鉴别[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(17):106-112. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221012.

CHEN Ziyuan,ZHAO Yuyang,XIE Xutao,et al.Identification of Murrayae Folium et Cacumen by Multiplex Allele-Specific PCR[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(17):106-112. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221012.

摘要

目的

建立一种同时鉴别九里香药材两基原九里香

Murraya exotica

和千里香

M. paniculata

的DNA分子鉴别方法。

方法

通过比较九里香、千里香的叶绿体基因组序列差异，根据叶绿体基因组上的单核苷酸多态性（SNP）变异位点分别设计九里香和千里香的特异性鉴别引物P03和P04，对影响聚合酶链式反应（PCR）结果的退火温度、循环次数、引物浓度比进行优化，建立了九里香和千里香的多重位点特异性PCR鉴别方法，并对影响该方法重复性的

Taq

酶种类、PCR仪型号进行耐受性考察和适用性考察。

结果

在该多重位点特异性PCR鉴别方法中，当PCR反应循环数为31次，退火温度为60 ℃，九里香P03和千里香P04引物比为1∶2时，九里香可获得约330 bp的特异性条带，千里香可得到约230 bp的特异性条带，不同来源的九里香和千里香样品使用建立的多重位点特异性PCR鉴别方法均可获得一致结果。

结论

该文建立一种快速、准确鉴别九里香药材基原的多重位点特异性PCR鉴别方法，可在单次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别九里香和千里香。

Abstract

Objective

To establish a polymerase chain reaction（PCR） method to accurately discriminate the crude materials of Murrayae Folium et Cacumen，

Murraya exotica

and

M. paniculata

Method

Based on the difference in chloroplast genome sequences of

M. exotica

and

M. paniculata

， species-specific identification primers P03 and P04 of

M. exotica

and

M. paniculata

were designed according to single nucleotide polymorphism （SNP） on the chloroplast genome. A multiplex allele-specific PCR identification method was established for the identification of

M. exotica

and

M. paniculata

following the optimization of annealing temperature， number of cycles， and primer concentration ratio. The established PCR method for identification was explored and verified in terms of tolerance and feasibility by investigating the type of

Taq

polymerases and PCR system model.

Result

In this multiplex allele-specific PCR identification method， about 330 and 230 bp of specific fragments were amplified from DNA templates of

M. exotica

and

M. paniculata

， respectively， under the following conditions：cycle number of 31， annealing temperature of 60 ℃， and primer concentration ratio of P03 and P04 of 1∶2. Consistent results were obtained for samples from different sources.

Conclusion

The multiplex allele-specific PCR identification method established in this study can accurately identify the origin of Murrayae Folium et Cacumen， which can be used for the simultaneous identification of

M. exotica

and

M. paniculata

by the length of fragments in a single identification assay.

关键词

Keywords

references

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