Effect of Pulsatilla Saponin A on Proliferation and Apoptosis of Burkitt Lymphoma Cells Based on JAK2/STAT3 Signaling Pathway

LIU Ning; BAI Jie; YU Hui; CHEN Xiaoli; KONG Xiangtu; NI Haiwen

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221225

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Effect of Pulsatilla Saponin A on Proliferation and Apoptosis of Burkitt Lymphoma Cells Based on JAK2/STAT3 Signaling Pathway

更新时间：2022-11-17

- Effect of Pulsatilla Saponin A on Proliferation and Apoptosis of Burkitt Lymphoma Cells Based on JAK2/STAT3 Signaling Pathway
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 28, Issue 20, Pages: 71-77(2022)
- 作者机构：
  
  1.南京中医药大学第一临床医学院，南京 210023
  2.江苏省中医院（南京中医药大学附属医院），南京 210029
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221225
  CLC： R22;R242;R2-031;R285.5
- Received：27 December 2021，
  
  Published Online：18 April 2022，
  
  Published：20 October 2022
- 稿件说明：
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刘宁,白洁,于慧等.基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(20):71-77.

LIU Ning,BAI Jie,YU Hui,et al.Effect of Pulsatilla Saponin A on Proliferation and Apoptosis of Burkitt Lymphoma Cells Based on JAK2/STAT3 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(20):71-77.
刘宁,白洁,于慧等.基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(20):71-77. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221225.

LIU Ning,BAI Jie,YU Hui,et al.Effect of Pulsatilla Saponin A on Proliferation and Apoptosis of Burkitt Lymphoma Cells Based on JAK2/STAT3 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(20):71-77. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221225.

摘要

目的

探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤（BL）细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。

方法

以人BL细胞Raji细胞为研究对象，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞增殖情况，并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度（IC

）分别为19.77、18.31、16.70 μmol·L

-1

。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC

，选用白头翁皂苷A 8、16、32 μmol·L

-1

开展实验。用0、8、16、32 μmol·L

-1

白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h，CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度

。检测经0、8、16、32 μmol·L

-1

白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测0、8、16、32 μmol·L

-1

白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h，Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）、活化的Caspase-3（cleaved Caspase-3）凋亡蛋白表达情况，检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2（JAK2）、信号转导及转录激活因子3（STAT3）、磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。

结果

与空白组比较，8、16、32 μmol·L

-1

白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制，8、16、32 μmol·L

-1

白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化（

0.01），细胞凋亡明显增加（

0.05，

0.01），细胞于有丝分裂准备期（G

）期阻滞明显增加（

0.05，

0.01）。与空白组比较，8、16、32 μmol·L

-1

白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低（

0.05，

0.01），Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加（

0.01），JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变，p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低（

0.05，

0.01）。

结论

白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。

Abstract

Objective

To investigate the effect of pulsatilla saponin A （PSA） on proliferation and apoptosis of human Burkitt lymphoma （BL） cell line Raji cells and expression of related pathway proteins.

Method

With Raji cells as the research object， the cell proliferation was detected by cell counting kit-8 （CCK-8） method， and the half-maximal inhibitory concentration （IC

） values of 24 h， 48 h and 72 h were calculated to be 19.77， 18.31， 16.70 μmol·L

-1

， respectively. In subsequent related experiments， 0， 8， 16， 32 μmol·L

-1

PSA were selected according to the IC

value of Raji cells treated with PAS for 72 h. After 0， 8， 16， 32 μmol·L

-1

PSA acted on Raji cells for 24， 48， 72 h， the optical density values of cell growth curve were detected by CCK-8 method. The zymogen activities of cysteine aspartate-specific protease （Caspase）-3， Caspase-8 and Caspase-9 in Raji cells treated with 0， 8， 16 and 32 μmol·L

-1

PSA for 24 h were measured by Caspase-3， Caspase-8 and Caspase-9 colorimetric assay kit. The apoptosis rate and cell cycle of Raji cells treated with different concentrations of PSA after 24 h were detected by flow cytometry. The expression of B-cell lymphoma 2 （Bcl-2）， Bcl-2-associated X protein （Bax）， cleaved poly（ADP-ribose） polymerase （cleaved PARP）， cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3 （cleaved Caspase-3） apoptosis related protein and Janus kinase 2 （JAK2）， signal transducer and activator of transcription 3 （STAT3）， phosphorylated-JAK2 （p-JAK2）， and phosphorylated- STAT3 （p-STAT3） pathway proteins in Raji cells after 24 h of treatment with 0， 8， 16 and 32 μmol·L

-1

PSA were tested by Western blot.

Result

Compared with control group， decreased cell survival rate， inhibited cell proliferation， activated zymogens of Caspase-3， Caspase-8 and Caspase-9 （

0.01）， increased apoptosis （

0.05，

0.01）， and enhanced cell cycle arrest in Gap phase 2 （G

） were observed in 8， 16 and 32 μmol·L

-1

PSA groups（

0.05，

0.01）. Compared with control group， cells treated with 8， 16 and 32 μmol·L

-1

PSA had lower expression of Bcl-2， p-JAK2， p-STAT3 proteins （

0.05，

0.01）， and higher expression of Bax， cleaved PARP and cleaved Caspase-3 protein （

0.01）， while no significant change was found in the expression of JAK2 and STAT3 proteins.

Conclusion

PSA could inhibit proliferation and induce apoptosis of Raji cells， and its potential mechanism might be related to the regulation of JAK2/STAT3 signaling pathway.

关键词

Keywords

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