Effect of Ermiaosan on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-induced Arthritis

HE Lianhua; LUAN Huijie; HE Juan; WANG Xiaocheng; HU Yiping; WANG Qingwen

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20222338

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Effect of Ermiaosan on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-induced Arthritis

更新时间：2022-12-21

- Effect of Ermiaosan on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-induced Arthritis
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 29, Issue 2, Pages: 66-72(2023)
- 作者机构：
  
  1.北京大学深圳医院，广东深圳 518036
  2.广州中医药大学第四临床医学院，广东深圳 518033
  3.深圳华润三九医药贸易有限公司，广东深圳 518109
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222338
  CLC： R2-0;R33;R289;R684.3
- Received：08 July 2022，
  
  Published Online：18 October 2022，
  
  Published：20 January 2023
- 稿件说明：
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何莲花,栾慧杰,何娟等.二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(02):66-72.

HE Lianhua,LUAN Huijie,HE Juan,et al.Effect of Ermiaosan on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-induced Arthritis[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(02):66-72.
何莲花,栾慧杰,何娟等.二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(02):66-72. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222338.

HE Lianhua,LUAN Huijie,HE Juan,et al.Effect of Ermiaosan on Expression of Th17/Treg Cells in DBA/1 Mice with Collagen-induced Arthritis[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(02):66-72. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222338.

摘要

目的

观察古代经典名方二妙散（EMS）对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎（CIA）中辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）分化的影响。

方法

按体质量将20只DBA/1小鼠随机分为正常组、CIA组，EMS（5.4 g·kg

-1

）组及甲氨蝶呤（MTX，0.5 mg·kg

-1

）组。CIA组、EMS组及MTX组在第1天以等体积牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂免疫DBA/1小鼠，于第21天以等体积牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂于尾根部有别于第1次免疫部位免疫DBA/1小鼠建立CIA模型（此为第2次免疫），并于第2次免疫当天开始灌胃给药，除MTX为每周3次外，其余每天1次，共给药28 d。第22天开始观察CIA小鼠的关节红肿等症状并进行关节炎评分，第49天取材后，采用苏木素-伊红（HE）染色观察CIA小鼠关节滑膜炎症的情况；免疫荧光（IF）双标法检测CIA小鼠关节中CD4

T细胞中Th17细胞标志物白细胞介素-17（IL-17）和Treg细胞标志物叉头框转录因子P3（FoxP3）在关节滑膜中的表达情况；流式细胞术检测小鼠脾脏及淋巴结中Th17和Treg的细胞比例情况。

结果

与正常组比较，CIA组小鼠关节滑膜炎症情况明显，小鼠关节结构严重紊乱，关节软骨及骨破坏明显，骨侵蚀严重（

0.01）；小鼠关节组织中Th17/Treg值显著升高（

0.01）；小鼠脾脏及淋巴结中Th17的细胞表达比例显著增高（

0.01），Treg细胞表达比例显著减少（

0.01）；与CIA组比较，EMS组和MTX组两组小鼠关节结构均相对正常，骨侵蚀、骨破坏较轻，关节面相对完整光滑；EMS组和MTX组两组中Th17/Treg值显著降低（

0.01）；小鼠脾脏及淋巴结组织中，EMS组、MTX组Th17细胞表达比例显著降低（

0.01），Treg细胞的表达比例显著增加（

0.01）。

结论

EMS通过调节Th17/Treg平衡，抑制CIA小鼠中Th17细胞的表达，促进Treg细胞的表达，进而治疗RA。

Abstract

Objective

To observe the effect of classic prescription Ermiaosan （EMS） on the differentiation of T helper 17 （Th17） /regulatory T （Treg） cells in collagen-induced arthritis （CIA） DBA/1 mice.

Method

DBA/1 mice were randomized into normal group， CIA group， EMS （5.4 g·kg

-1

） group， and methotrexate （MTX，0.5 mg·kg

-1

） group according to the body weight. DBA/1 mice in CIA group， EMS group， and MTX group were immunized with equal volume of bovine type Ⅱ collagen and complete Freund's adjuvant on the first day and were immunized with equal volume of bovine type Ⅱ collagen and incomplete Freund's adjuvant on the 21

day to induce CIA. On the day of the secondary immunization， intragastric administration started and lasted 28 days （three times/week for MTX group， and once/day for other groups）. The symptoms of CIA mice such as joint redness and swelling were observed from the 22

day， and the arthritis was scored. After the sampling on the 49

day， synovitis of CIA mice was observed based on hematoxylin-eosin （HE） staining. Double-labeling immunofluorescence （IF） method was used to detect the expression of Th17 cell marker IL-17 and Treg cell marker forkhead transcription factor P3 （FoxP3） in CD4

T cells in CIA mouse joints. The proportion of Th17 and Treg cells in the spleen and lymph nodes of mice was detected by flow cytometry.

Result

Compared with the normal group， CIA group had obvious synovitis， disordered joint structure， severely damaged articular cartilage and bone， serious bone erosion （

0.01）， high Th17/Treg value in joint tissue （

0.01）， high proportion of Th17 cells in spleen and lymph nodes （

0.01）， and low proportion of Treg cells （

0.01）. Compared with CIA group， EMS group and MTX group had normal joint structure， mild bone erosion and bone destruction， complete and smooth joint surface， low Th17/Treg value （

0.01）， low proportion of Th17 cells in spleen and lymph nodes （

0.01）， and high proportion of Treg cells in spleen and lymph nodes （

0.01）.

Conclusion

EMS regulates the balance of Th17/Treg， inhibits the expression of Th17 cells， and promotes the expression of Treg cells in CIA mice， thereby exerting therapeutic effect on RA.

关键词

Keywords

references

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