Effect and Mechanism of Osthole on Proliferation and Apoptosis in Human Intrahepatic Cholangiocarcinoma HuCCT1 Cells

DENG Dongjie; LI Li; WANG Chuting; SUN Yi; MENG Yan; WANG Guihong; ZHENG Guohua; HU Junjie

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20222423

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Effect and Mechanism of Osthole on Proliferation and Apoptosis in Human Intrahepatic Cholangiocarcinoma HuCCT1 Cells

更新时间：2023-09-21

- Effect and Mechanism of Osthole on Proliferation and Apoptosis in Human Intrahepatic Cholangiocarcinoma HuCCT1 Cells
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 29, Issue 20, Pages: 54-60(2023)
- 作者机构：
  
  1.湖北中医药大学药学院，武汉 430065
  2.湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室，武汉 430065
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222423
  CLC： R22;R242;R2-031;R285.5
- Published：20 October 2023，
  
  Published Online：21 October 2022，
  
  Received：27 July 2022，
- 稿件说明：
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邓冬杰,李励,王楚婷等.蛇床子素对人肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖与凋亡的影响及其机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(20):54-60.

DENG Dongjie,LI Li,WANG Chuting,et al.Effect and Mechanism of Osthole on Proliferation and Apoptosis in Human Intrahepatic Cholangiocarcinoma HuCCT1 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(20):54-60.
邓冬杰,李励,王楚婷等.蛇床子素对人肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖与凋亡的影响及其机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(20):54-60. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222423.

DENG Dongjie,LI Li,WANG Chuting,et al.Effect and Mechanism of Osthole on Proliferation and Apoptosis in Human Intrahepatic Cholangiocarcinoma HuCCT1 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(20):54-60. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222423.

摘要

目的

观察蛇床子素对人肝内胆管癌HuCCT1细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。

方法

采用细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测10、20、40、80、120 μmol·L

-1

蛇床子素对HuCCT1细胞增殖的影响；分别设置空白组、蛇床子素低、中、高浓度组（16、32、64 μmol·L

-1

）；采用平板克隆实验检测蛇床子素对细胞克隆形成率的影响；采用流式细胞术检测蛇床子素对细胞周期与凋亡的影响；采用Hoechst33342荧光染色实验检测蛇床子素对细胞凋亡形态的影响；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蛇床子素对细胞周期蛋白B

（cyclin B

）、增殖细胞核抗原（PCNA）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、剪切的Caspase-9（cleaved Caspase-9）、剪切的Caspase-3（cleaved Caspase-3）、剪切的多聚（ADP-核糖）聚合酶PARP（cleaved PARP）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、磷酸化核糖体蛋白（p-RPS6）表达水平的影响。

结果

与空白组比较，蛇床子素组（40、80、120 μmol·L

-1

）细胞存活率明显降低（

0.05，

0.01），其半数抑制浓度（IC

）为63.8 μmol·L

-1

；与空白组比较，蛇床子素组（32、64 μmol·L

-1

）细胞的克隆形成率显著降低（

0.01），蛇床子素组（32、64 μmol·L

-1

）细胞G

期细胞数量增加（

0.05，

0.01），蛇床子素组（32、64 μmol·L

-1

）细胞数量明显减少，核固缩、碎裂增多，细胞凋亡率增加（

0.05，

0.01），蛇床子素组（32、64 μmol·L

-1

）细胞中cyclin B

、PCNA、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、p-Akt、p-mTOR、p-RPS6表达降低（

0.05，

0.01），cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、cleaved PARP表达升高（

0.05，

0.01）。

结论

蛇床子素可抑制HuCCT1细胞增殖，促进其凋亡，其机制可能与Akt/mTOR信号通路有关。

Abstract

Objective

To investigate the effect and mechanism of osthole on the proliferation and apoptosis in human intrahepatic cholangiocarcinoma HuCCT1 cells.

Method

The effect of 10， 20， 40， 80， and 120 μmol·L

-1

osthole on the proliferation of HuCCT1 cells was detected by the cell counting kit-8 （CCK-8）. A blank group， and low-， medium-， and high-dose osthole groups （16， 32， and 64 μmol·L

-1

） were set up. The effect of osthole on cell clone formation rate was detected by colony formation assay. The effect of osthole on cell cycle and apoptosis was detected by flow cytometry. The effect of osthole on cell apoptotic morphology was detected by Hoechst 33342 fluorescent staining. The effect of osthole on cell cycle protein cyclin B

， proliferating cell nuclear antigen （PCNA）， cysteine-aspartic acid protease （Caspase）-9， Caspase-3， cleaved Caspase-9， cleaved Caspase-3， cleaved poly（ADP-ribose） polymerase （cleaved PARP）， B-cell lymphoma-2 （Bcl-2）， phosphorylated protein kinase B （p-Akt）， phosphorylated mammalian target of rapamycin （p-mTOR）， and phosphorylated ribosomal protein S6 （p-RPS6） was detected by Western blot.

Result

The cell viability in the osthole group（40，80，120 μmol·L

-1

） decreased （

0.05，

0.01）， with the half maximal inhibitory concentration （IC

） of 63.8 μmol·L

-1

as compared with that in the blank group. Compared with the blank group， the osthole groups（32，64 μmol·L

-1

）showed reduced clone formation rate （

0.01）， increased number of cells in the G

phase （

0.05，

0.01）， decreased number of cells， increased pyknosis and fragmentation， increased apoptosis rate （

0.05，

0.01）， down-regulated expression of cyclin B

， PCNA， Bcl-2， Caspase-3， Caspase-9， p-Akt， p-mTOR， and p-RPS6 （

0.05，

0.01）， and up-regulated expression of cleaved Caspase-3， cleaved Caspase-9， and cleaved PARP

（

0.05，

0.01）.

Conclusion

Osthole can inhibit the proliferation and promote the apoptosis of HuCCT1 cells， and its mechanism may be related to the Akt/mTOR signaling pathway.

关键词

蛇床子素肝内胆管癌增殖凋亡蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

Keywords

ostholeintrahepatic cholangiocarcinomaproliferationapoptosisprotein kinase B/mammalian target of rapamycin

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