Effect and Mechanism of Nongsuo Dangguiwan in Relieving Oxidative Stress in Premature Ovarian Insufficiency Rats Based on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway

LUO Jiaqi; DU Xiaoli; CHEN Dongmei; CHEN Miao; HU Na; XING Shasha; LIU Wenzhao; TIAN Ruiying; YANG Li; WANG Jing; HE Rui; MA Huiming

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20230403

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Effect and Mechanism of Nongsuo Dangguiwan in Relieving Oxidative Stress in Premature Ovarian Insufficiency Rats Based on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway

更新时间：2023-06-02

- Effect and Mechanism of Nongsuo Dangguiwan in Relieving Oxidative Stress in Premature Ovarian Insufficiency Rats Based on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 29, Issue 13, Pages: 1-9(2023)
- 作者机构：
  
  1.宁夏医科大学，银川 750004
  2.宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室，银川 750004
  3.宁夏医科大学宁夏少数民族医药现代化教育部重点实验室，银川 750004
  4.宁夏区域高发病中西医结合防治研究重点实验室，银川 750004
  5.宁夏医科大学总医院宁夏干细胞与再生医学重点实验室，银川 750004
  6.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004
  7.宁夏医科大学实验动物中心，银川 750004
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230403
  CLC： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- Received：15 September 2022，
  
  Published Online：02 February 2023，
  
  Published：05 July 2023
- 稿件说明：
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罗嘉琦,杜小利,陈冬梅等.基于Nrf2/HO-1信号通路探讨浓缩当归丸对缓解卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(13):1-9.

LUO Jiaqi,DU Xiaoli,CHEN Dongmei,et al.Effect and Mechanism of Nongsuo Dangguiwan in Relieving Oxidative Stress in Premature Ovarian Insufficiency Rats Based on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(13):1-9.
罗嘉琦,杜小利,陈冬梅等.基于Nrf2/HO-1信号通路探讨浓缩当归丸对缓解卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(13):1-9. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230403.

LUO Jiaqi,DU Xiaoli,CHEN Dongmei,et al.Effect and Mechanism of Nongsuo Dangguiwan in Relieving Oxidative Stress in Premature Ovarian Insufficiency Rats Based on Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(13):1-9. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230403.

摘要

目的

探讨浓缩当归丸改善卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的作用及机制。

方法

36只成年雌性SD大鼠，随机分为正常组、模型组、雌二醇（E

）/地屈孕酮片组、浓缩当归丸高、中、低剂量组，每组6只。除正常组外，其余各组大鼠每日腹腔注射乙烯基环己烯（VCD）80 mg·kg

-1

造模，连续14 d。从第15天起，模型组灌胃生理盐水2 mL·kg

-1

；雌二醇/地屈孕酮片组灌胃芬吗通0.3 mg·kg

-1

；浓缩当归丸高、中、低剂量组灌胃浓缩当归丸2.08、4.16、8.32 g·kg

-1

，每日1次，连续给药28 d。测定大鼠卵巢指数；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中相关激素E

、促卵泡激素（FSH）、卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）和抗缪勒管激素（AMH）水平，以及血清过氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽（GSH）含量；硫代巴比妥酸（TAB）法检测血清丙二醛（MDA）含量；苏木素-伊红（HE）染色法观察卵巢形态学变化；免疫组化法（IHC）检测卵巢组织中核因子E

相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、SOD2、SOD1的表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织中Nrf2、HO-1、SOD2、SOD1蛋白的相对表达量。

结果

与正常组比较，模型组大鼠卵巢中生长卵泡明显减少、卵泡颗粒层排列松散；大鼠体质量、卵巢指数和血清AMH、E

水平显著下降，LH、FSH水平均显著升高（

0.01）；SOD和GSH水平显著下降（

0.01），MDA水平显著升高（

0.01）。与模型组比较，E

/地屈孕酮片组和浓缩当归丸各组卵巢指数均明显增加（

0.05，

0.01），血清中E

水平明显升高（

0.05，

0.01），FSH、AMH、LH水平明显降低（

0.05，

0.01）；卵巢内生长卵泡数量增多；血清中SOD活性增强，GSH含量升高，MDA含量明显下降（

0.05，

0.01）；卵巢组织中Nrf2、HO-1、SOD2、SOD1蛋白表达水平明显上调（

0.05，

0.01）。

结论

浓缩当归丸能够调节血清激素水平，且增加卵巢组织中Nrf2、HO-1、SOD2、SOD1因子的表达，提高卵巢组织抗氧化能力抵抗氧化应激损伤，从而改善卵巢储备功能。

Abstract

Objective

To investigate the effect and mechanism of Nongsuo Dangguiwan in improving ovarian oxidative stress in rats with ovarian dysfunction.

Method

Thirty-six adult female SD rats were randomly divided into normal group， model group， positive drug group （Femoston， 0.3 mg·kg

-1

）， and high-， medium-， and low-dose groups of concentrated Nongsuo Dangguiwan （2.08， 4.16， 8.32 g·kg

-1

）， with six rats in each group. Rats， except for those in the normal group， were injected with 80 mg·kg

-1

vinyl cyclohexene dioxide （VCD） per day for 14 consecutive days to induce ovarian dysfunction. From the 15th day， rats were treated with corresponding drugs by gavage， while those in the model group received 2 mL·kg

-1

saline， once daily for 28 consecutive days. The ovarian index， levels of related hormones including estradiol （E

）， follicle-stimulating hormone （FSH）， luteinizing hormone （LH）， and anti-mullerian hormone （AMH） in serum， as well as superoxide dismutase （SOD） activity and glutathione （GSH） content in serum were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The malondialdehyde （MDA） content in serum was detected by the thiobarbituric acid （TAB） method. Ovarian morphology was observed by hematoxylin-eosin （HE） staining. The expression of nuclear factor E

-related factor 2 （Nrf2）， heme oxygenase-1 （HO-1）， SOD2， and SOD1 in ovarian tissues was detected by immunohistochemistry （IHC） and Western blot.

Result

Compared with the normal group， the model group showed a significant reduction in growing follicles in the ovary， loose arrangement of granulosa cells in the follicle， decreased body weight， ovarian index， and serum AMH and E

levels， increased LH and FSH levels （

0.01）， reduced levels of SOD and GSH in serum （

0.01）， and increased MDA level （

0.01）. Compared with the model group， the groups with drug intervention showed increased ovarian index （

0.05，

0.01）， increased serum E

level （

0.05，

0.01）， decreased FSH， AMH， and LH levels （

0.05，

0.01）， increased number of growing follicles in the ovary， potentiated SOD activity in serum， increased GSH content， decreased MDA content （

0.05，

0.01）， and up-regulated expression levels of Nrf2， HO-1， SOD2， and SOD1 proteins in ovarian tissues （

0.05，

0.01）.

Conclusion

Nongsuo Dangguiwan can regulate serum hormone levels， increase the expression of Nrf2， HO-1， SOD2， and SOD1 in ovarian tissues， and improve ovarian antioxidant capacity to resist oxidative stress injury， thereby improving ovarian reserve function.

关键词

Keywords

references

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