Therapeutic Effect of Compound Wufengcao Liquid on Tuberculous Ulcer from Perspective of Macrophages

QIAN Jiayan; HUANG Zihui; SUN Jiayue; Xu Feiyun; Wang Yuling; Yu yang

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.202304091

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Therapeutic Effect of Compound Wufengcao Liquid on Tuberculous Ulcer from Perspective of Macrophages

更新时间：2023-01-17

- Therapeutic Effect of Compound Wufengcao Liquid on Tuberculous Ulcer from Perspective of Macrophages
  增强出版
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 29, Issue 4, Pages: 86-96(2023)
- 作者机构：
  
  南京中医药大学附属南京市中西医结合医院，江苏 210014
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.202304091
  CLC： R22;R242;R2-031;R285.5;R287
- Received：14 April 2022，
  
  Published Online：01 July 2022，
  
  Published：20 February 2023
- 稿件说明：
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钱佳燕,黄子慧,孙佳玥等.从巨噬细胞角度探讨复方五凤草液干预结核性溃疡的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(04):86-96.

QIAN Jiayan,HUANG Zihui,SUN Jiayue,et al.Therapeutic Effect of Compound Wufengcao Liquid on Tuberculous Ulcer from Perspective of Macrophages[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(04):86-96.
钱佳燕,黄子慧,孙佳玥等.从巨噬细胞角度探讨复方五凤草液干预结核性溃疡的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(04):86-96. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202304091.

QIAN Jiayan,HUANG Zihui,SUN Jiayue,et al.Therapeutic Effect of Compound Wufengcao Liquid on Tuberculous Ulcer from Perspective of Macrophages[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(04):86-96. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202304091.

摘要

目的

探讨复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效及对巨噬细胞极化的影响。

方法

①临床实验。将南京市中西医结合医院145例结核性溃疡患者按随机数字表法分为观察组、对照Ⅰ组和对照Ⅱ组。3组均予以基础抗结核化学治疗的同时，观察组予以复方五凤草液，对照Ⅰ组予以康复新液，对照Ⅱ组予以异烟肼液局部外用治疗，疗程4周。分别观察3组患者创面愈合总有效率、中医证候积分、创面组织病理学形态及创面组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1（Arg-1）的表达水平。②细胞实验。RAW264.7细胞在完全培养基DMEM（10%的胎牛血清，1%青-链酶素溶液）于37 ℃、5% CO

的细胞培养箱中培养。经佛波酯（PMA）诱导后向巨噬细胞分化，分别用脂多糖（LPS）诱导成M1巨噬细胞、白细胞介素-4（IL-4）诱导成M2巨噬细胞，分别予康复新溶液、异烟肼液、复方五凤草液处理以上细胞模型36 h，收集细胞上清液并离心，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤坏死因子-

（TNF-

）、转化生长因子-

（TGF-

）、iNOS和Arg-1的蛋白量的表达，流式细胞术（FCM）检测药物对CD86、CD206表达的影响。

结果

①临床实验。与对照Ⅰ组［87.5%（42/48），

=3.962，

0.05］和对照Ⅱ组［83.3%（40/48），

=6.162，

0.05］比较，复方五凤草液组的总有效率［98.0%（48/49）］明显较高；治疗28 d后，与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较，复方五凤草液组的中医证候积分明显降低（

0.05），复方五凤草液组创面组织病理学形态改善更为明显；免疫组化结果显示，治疗28 d后，与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较，复方五凤草液组局部病灶组织样本中的iNOS表达量明显降低（

0.05），Arg-1表达量显著升高（

0.05，

0.01）。②细胞实验。Western blot实验结果显示，与M0组比较，LPS组中iNOS、TNF-

表达升高（

0.01）。与LPS组比较，LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS、TNF-

表达下降（

0.05）；与LPS+异烟肼组比较，LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS表达下降（

0.05，

0.01），LPS+复方五凤草液组TNF-

水平显著下降（

0.01）；与LPS+康复新液组比较，LPS+复方五凤草液组中TNF-

表达下降（

0.05）。与M0组比较，IL-4组中Arg-1、TGF-

表达升高（

0.01）。与IL-4组比较，IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-

表达升高（

0.05，

0.01）。与IL-4+异烟肼组比较，IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-

表达升高（

0.05，

0.01）；与IL-4+康复新液组比较，IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-

表达升高（

0.05，

0.01）。流式细胞术结果显示，与M0组比较，LPS组CD86表达升高，IL-4组中CD206表达升高（

0.01）。与LPS组比较，LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（

0.01）；与LPS+异烟肼组比较，LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（

0.01）；与LPS+康复新液组比较，LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（

0.01）。与IL-4组比较，IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（

0.01）；与IL-4+异烟肼组比较，IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（

0.01）；与IL-4+康复新液组比较，IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（

0.05）。

结论

复方五凤草液能有效促进结核性溃疡愈合，其作用机制可能是通过抑制iNOS、TNF-

、CD86的表达并促进Arg-1、TGF-

、CD206的表达，从而调控M1/M2巨噬细胞极化平衡来完成。

Abstract

Objective

To explore the clinical efficacy of compound Wufengcao liquid （CWL） on tuberculous ulcer and the influence on macrophage polarization.

Method

① Clinical experiment： A total of 145 patients with tuberculous ulcer who were treated in Nanjing Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Hospital were randomized into observation group， control group Ⅰ， and control group Ⅱ according to the random number table method. In addition to the basic anti-tuberculosis chemotherapy， CWL， Kangfuxin liquid， and isoniazid solution （local external application） were respectively used in the observation group， control group Ⅰ， and control group Ⅱ. The treatment lasted 4 weeks for each group. The total effective rate in wound healing， traditional Chinese medicine（TCM） syndrome score， and histopathological morphology of wound were observed and the expression of inducible nitric oxide synthase （iNOS） and arginase-1 （Arg-1） in wound tissue was measured. ② Cell experiment： RAW264.7 cells were cultured in DMEM （10% fetal bovine serum， 1% double-antibody solution） in a cell incubator （37 °C， 5% CO

）. Phorbol 12-myristate 13-acetate （PMA） was used to induce the differentiation of RAW264.7 cells into macrophages. Lipopolysaccharide （LPS） was employed to stimulate polarization of macrophages into M1 type and interleukin-4 （IL-4） to induce the polarization into M2 type. Kangfuxin solution， isoniazid solution， and CWL were respectively applied to the above cell model for 36 h. The cell supernatant was collected and centrifuged. Western blot was used to detect the protein expression of tumor necrosis factor-

（TNF-

）， transforming growth factor-

（TGF-

）， iNOS， and Arg-1， and flow cytometry （FCM） to detect the expression of CD86 and CD206.

Result

①Clinical experiment： The total effective rate in the CWL group ［98.0% （48/49）］ was higher than that in the control group Ⅰ ［87.5% （42/48），

=3.962，

0.05］ and control group Ⅱ ［83.3% （40/48），

=6.162，

0.05］. After 28 days of treatment， compared with control group Ⅰ and control group Ⅱ， CWL decreased the TCM syndrome score （

0.05） and obviously improved the histopathological morphology of the wound. Immunohistochemistry results showed that the iNOS expression in local focus tissue was lower （

0.05） and the expression of Arg-1 was higher （

0.05，

0.01） in the CWL group than in the control group Ⅰ and control group Ⅱ after 28 days of treatment. ② Cell experiment： Western blot assay showed that the expression of iNOS and TNF-

in LPS group increased compared with that in the M0 group （

0.01） and the expression in the LPS+ isoniazid group， LPS+ Kangfuxin group， and LPS+CWL group was lower than that in the LPS group （

0.05）. The expression of iNOS in LPS+Kangfuxin group and LPS+ CWL group was lower than that in the LPS+isoniazid group （

0.05，

0.01）， and the expression of TNF-

in LPS+ CWL group was lower than that in LPS+isoniazid group （

0.01）. The expression of TNF-

in LPS+ CWL group decreased compared with that in the LPS+ Kangfuxin group （

0.05）. The expression of Arg-1 and TGF-

in IL-4 group was higher than that in the M0 group （

0.01）， and the expression in the IL-4+isoniazid group， IL-4+Kangfuxin group， and IL-4+ CWL group was higher than that in the IL-4 group （

0.05）. The expression of Arg-1 and TGF-

in the IL-4+ Kangfuxin group and IL-4+CWL group was higher than that in the IL-4+isoniazid group （

0.05，

0.01）， and the expression was higher in the IL-4+CWL group than in the IL-4+Kangfuxin group （

0.05，

0.01）. The FCM result showed that the expression of CD86 and CD206 in LPS group and IL-4 group was higher than that in M0 group （

0.01）. CD86 expression in LPS+isoniazid group， LPS+ Kangfuxin group， and LPS+CWL group was lower than that in the LPS group （

0.01）. The expression of CD86 in LPS+Kangfuxin group and LPS+ CWL group increased compared with that in the LPS+isoniazid group （

0.01）， and the expression was higher in the LPS+ CWL group than in the LPS+Kangfuxin group （

0.01）. CD206 expression in IL-4+ isoniazid group， IL-4+Kangfuxin liquor group， and IL-4+ CWL group was increased compared with that in the IL-4 group （

0.01）. CD206 expression in IL-4+Kangfuxin liquid group and IL-4+ CWL group was decreased compared with that in the IL-4+isoniazid group （

0.01）. CD206 expression in IL-4+CWL group was lower than that in the IL-4+ Kangfuxin group （

0.05）.

Conclusion

CWL can promote the healing of tuberculous ulcers， and the mechanism is that it inhibits the expression of iNOS， TNF-

， and CD86 and promotes the expression of Arg-1， TGF-

， and CD206， thereby regulating M1/M2 polarization balance.

关键词

Keywords

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