Mechanism of Dahuang Zhechongwan in Treating Myocardial Fibrosis of Rats via TGF-<italic style="font-style: italic">β</italic><sub>1</sub>/Smads/miR29 Pathway

LIANG Jingtao; HE Xiaoyan; WANG Min; HUO Zhiying; GUO Fan; WU Lijuan

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20230737

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Mechanism of Dahuang Zhechongwan in Treating Myocardial Fibrosis of Rats via TGF-β₁/Smads/miR29 Pathway

更新时间：2023-06-20

- Mechanism of Dahuang Zhechongwan in Treating Myocardial Fibrosis of Rats via TGF-β₁/Smads/miR29 Pathway
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 29, Issue 14, Pages: 21-29(2023)
- 作者机构：
  
  1.成都中医药大学附属医院，成都 610072
  2.成都中医药大学公共卫生学院，成都 610075
  3.成都市青羊区府南金沙社区卫生服务中心，成都 610000
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230737
  CLC： R2-0;R33;R289;R542.2+3
- Received：28 February 2023，
  
  Published Online：12 May 2023，
  
  Published：20 July 2023
- 稿件说明：
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梁静涛,何晓艳,王敏等.大黄䗪虫丸经TGF-β₁/Smads/miR-29通路干预大鼠心肌纤维化的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(14):21-29.

LIANG Jingtao,HE Xiaoyan,WANG Min,et al.Mechanism of Dahuang Zhechongwan in Treating Myocardial Fibrosis of Rats via TGF-β₁/Smads/miR29 Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(14):21-29.
梁静涛,何晓艳,王敏等.大黄䗪虫丸经TGF-β₁/Smads/miR-29通路干预大鼠心肌纤维化的机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(14):21-29. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230737.

LIANG Jingtao,HE Xiaoyan,WANG Min,et al.Mechanism of Dahuang Zhechongwan in Treating Myocardial Fibrosis of Rats via TGF-β₁/Smads/miR29 Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(14):21-29. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230737.

摘要

目的

运用经方大黄䗪虫丸（DHZCW）干预大鼠心肌纤维化模型，观察其对大鼠心肌纤维化的影响并探讨其作用机制。

方法

选用SPF级雄性昆明种大鼠36只，分为空白组、模型组和DHZCW低、中、高剂量组（0.056、0.084、0.168 g·kg

-1

）、卡托普利组（10 mg·kg

-1

）组，每组6只。除空白组外，其余各组在大鼠腹腔注射异丙肾上腺素溶液5 mg·kg

-1

，连续15 d，复制心肌纤维化模型。造模开始时便同时给药，给药后28 d处死各组大鼠，取血清及心脏组织进行相关检测。采用苏木素-伊红（HE）染色和马松（Masson）染色，观察组织炎症、细胞变性、坏死及纤维化等情况。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠和大鼠血清中的羟脯氨酸（HYP）、肿瘤坏死因子-

（TNF-

）、白细胞介素-1

（IL-1

）、白细胞介素-6（IL-6）、大鼠血清中透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）的含量。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测关键通路蛋白转化生长因子-

（TGF-

）、

-平滑肌肌动蛋白（

-SMA）、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测关键通路基因TGF-

、

-SMA、Smad2、Smad3、Smad7、微小RNA（miR）-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p的mRNA表达水平。

结果

与空白组比较，模型组中的纤维化病理损伤改变明显，血清HYP、TNF-

、IL-1

、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均升高（

0.01），TGF-

、

-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量升高（

0.01），Smad7蛋白含量降低（

0.01）。TGF-

、

-SMA、Smad2、Smad3 mRNA表达水平升高（

0.05，

0.01），Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p mRNA表达降低（

0.01）；与模型组比较，给药28 d后，DHZCW高、中、低剂量组和卡托普利组血清HYP、TNF-

、IL-1

、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均降低（

0.01），除低剂量组，TGF-

、

-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量降低，Smad7升高（

0.01）；DHZCW高剂量组中TGF-

、Smad2、

-SMA、Smad3 mRNA表达水平降低（

0.05，

0.01），Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p mRNA升高（

0.05）；DHZCW中剂量组的TGF-

、Smad2、Smad3的mRNA表达降低（

0.05，

0.01），而Smad7 mRNA升高（

0.01）；DHZCW低剂量组TGF-

、Smad2 mRNA降低（

0.01）。

结论

DHZCW能改善大鼠心肌纤维化，其作用机制可能与调控TGF-

/Smads/miR-29通路有关，且在0.056~0.168 g·kg

-1

存在剂量依赖性，高剂量组效果更加稳定。

Abstract

Objective

Traditional Chinese medicine， namely Dahuang Zhechongwan （DHZCW） was used to treat myocardial fibrosis in model rats， observe its effect on myocardial fibrosis in rats， and explore its action mechanism.

Method

Thirty-six SPF male Kunming rats were divided into blank group， model group， low-， medium-， high-dose groups of DHZCW （0.056， 0.084， 0.168 g·kg

-1

）， captopril group （10 mg·kg

-1

）， with six rats in each group. Except for the blank group， the other groups were intraperitoneally injected isoproterenol solution of 5 mg·kg

-1

for 15 consecutive days to replicate the myocardial fibrosis model. At the beginning of modeling， the rats in each group took drugs， and they were sacrificed 28 days after administration. Serum and heart tissue were collected for the corresponding detection. Hematoxylin-eosin （HE） staining and Masson staining were used to observe tissue inflammation， cellular degeneration， necrosis， and fibrosis. The contents of hydroxyproline （HYP）， tumor necrosis factor-

（TNF-

）， interleukin-1

（IL-1

）， interleukin-6 （IL-6）， hyaluronic acid （HA）， laminin （LN）， type-Ⅲ procollagen （PC Ⅲ） in serum of rats and rats were determined by enzyme-related immunosorbent assay （ELISA）. The expression levels of key pathway proteins transforming growth factor-

（TGF-

），

-smooth muscle actin （

-SMA）， Smad2， Smad3， and Smad7 were detected by Western blot. The expression levels of key pathway genes TGF-

，

-SMA， Smad2， Smad3， Smad7， miR-29a-5p， miR-29b-2-5p， and miR-29c-5p were detected by Real-time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）.

Result

Compared with the blank group， the pathological changes of fibrosis in the model group were obvious， the contents of serum HYP， TNF-

， IL-1

， IL-6， HA， LN， and PCⅢ were increased （

0.01）， the protein expression levels of TGF-

，

-SMA， Smad2， and Smad3 were increased； the protein expression level of Smad7 was decreased （

0.01）. The mRNA expression levels of TGF-

，

-SMA， Smad2， and Smad3 were increased （

0.05，

0.01）， while those of Smad7， miR-29a-5p， miR-29b-2-5p， and miR-29c-5p were decreased （

0.01）. Compared with the model group， after 28 days of administration， serum HYP， TNF-

， IL-1

， IL-6， HA， LN， and PCⅢ in high-， medium-， and low-dose groups of DHZCW and captopril groups were decreased （

0.01）. Except for the low-dose group， the protein contents of TGF-

，

-SMA， Smad2， and Smad3 were decreased， while the protein content of Smad7 was increased （

0.01）. The mRNA expression levels of TGF-

， Smad2，

-SMA， and Smad3 in high-dose group of DHZCW were decreased （

0.05，

0.01）， while those of Smad7， miR-29a-5p， miR-29b-2-5p， and miR-29c-5p were increased （

0.05）. The mRNA expressions of TGF-

， Smad2， and Smad3 in the medium-dose group of DHZCW were decreased （

0.05，

0.01）， while mRNA expression of Smad7 was increased （

0.01）. The mRNA levels of TGF-

and Smad2 in the low-dose group of DHZCW were decreased （

0.01）.

Conclusion

DHZCW can improve myocardial fibrosis in rats， and its action mechanism may be related to the regulation of the TGF-

/Smads/miR-29 pathway. In addition， there is dose dependence in the range of 0.056-0.168 g·kg

-1

， and the effect of the high-dose group is more stable.

关键词

Keywords

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