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Zishen Tiaogan Prescription Treats Diminished Ovarian Reserve in Rats via Keap1/Nrf2/HO-1 Signaling Pathway
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 31, Issue 7, Pages: 72-80(2025)
- 作者机构：
1.广西中医药大学，南宁 530000
2.广西中医药大学 附属瑞康医院，南宁 530000
- 作者简介：
- 基金信息：
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20241539
CLC： R271;R289;R242Received：19 June 2024，
Accepted：18 September 2024，
Published Online：20 September 2024，
Published：05 April 2025
- 稿件说明：
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李钟彤,张亚萍,游琛等.基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨滋肾调肝方对卵巢储备功能下降模型大鼠的影响[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(07):72-80.
LI Zhongtong,ZHANG Yaping,YOU Chen,et al.Zishen Tiaogan Prescription Treats Diminished Ovarian Reserve in Rats via Keap1/Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(07):72-80.
李钟彤,张亚萍,游琛等.基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨滋肾调肝方对卵巢储备功能下降模型大鼠的影响[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(07):72-80. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241539.
LI Zhongtong,ZHANG Yaping,YOU Chen,et al.Zishen Tiaogan Prescription Treats Diminished Ovarian Reserve in Rats via Keap1/Nrf2/HO-1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(07):72-80. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241539.
摘要
目的
2
观察滋肾调肝方改善卵巢储备功能下降（DOR）模型大鼠氧化应激损伤的作用，并探讨Kelch样ECH关联蛋白1（Keap1）/核因子E
2
相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）信号通路在其中的作用机制。
方法
2
将48只雌性SD大鼠随机分为正常组12只，造模组36只，造模组大鼠连续每日皮下注射半乳糖（350 mg·kg
-1
）联合制动应激法建立模型，造模28 d后将正常组和造模组各处死6只验证模型。模型验证成功后，将造模组分为模型组，戊酸雌二醇（0.09 mg·kg
-1
）组和滋肾调肝方低、中、高剂量（6.39、12.78、25.56 g·kg
-1
）组，以6只/组进行相应干预，持续4周。苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠动情周期及卵巢病理形态学变化，计算大鼠卵巢脏器指数；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中性激素及氧化应激相关指标的变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测卵巢组织中Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA表达情况；免疫组化（IHC）检测卵巢组织中超氧化物歧化酶2（SOD2）蛋白的阳性表达。
结果
2
与正常组比较，模型组大鼠卵巢中生长卵泡明显减少、卵泡颗粒层排列松散；大鼠卵巢指数和血清抗缪勒管激素（AMH）、雌二醇（E
2
）水平显著下降，黄体生成素（LH）、促卵泡生成素（FSH）水平均显著升高（
P
<
0.01）；超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平显著下降（
P
<
0.01），丙二醛（MDA）水平显著升高（
P
<
0.01），卵巢组织中Keap1蛋白及mRNA表达显著增加（
P
<
0.01），Nrf2、HO-1蛋白表达显著减少（
P
<
0.01），Nrf2 mRNA表达明显降低（
P
<
0.05），HO-1 mRNA表达显著下降（
P
<
0.01），SOD2蛋白阳性表达显著减少（
P
<
0.01）；与模型组比较，戊酸雌二醇组及滋肾调肝方低、中、高剂量组卵巢指数均明显增加（
P
<
0.05，
P
<
0.01），血清中AMH、E
2
水平显著升高（
P
<
0.01），FSH、LH水平显著降低（
P
<
0.01）；卵巢内生长卵泡数量增多，血清中SOD活性增强，CAT活力升高，GSH含量增加，MDA含量减少（
P
<
0.05，
P
<
0.01）；卵巢组织中Keap1蛋白及mRNA表达显著减少（
P
<
0.01），Nrf2蛋白表达显著增加（
P
<
0.01），HO-1蛋白表达水平明显升高（
P
<
0.05，
P
<
0.01），Nrf2、HO-1 mRNA表达水平显著上调（
P
<
0.01），SOD2蛋白的阳性表达显著增加（
P
<
0.01）。
结论
2
滋肾调肝方能够调节血清激素水平，降低Keap1的表达水平，上调卵巢组织中Nrf2、HO-1、SOD2因子的表达，增强DOR大鼠卵巢的抗氧化能力，减轻卵巢过氧化损伤，改善卵巢储备功能，其机制可能与Keap1/Nrf2/HO-1通路相关。
Abstract
Objective
2
To observe the effect of Zishen Tiaogan prescription on the oxidative stress injury in the rat model of diminished ovarian reserve （DOR） and explore the role of the Kelch-like ECH-associated protein 1 （Keap1）/nuclear factor E
2
-related factor 2 （Nrf2）/heme oxygenase-1 （HO-1） signaling pathway.
Methods
2
Forty-eight female SD rats were randomly assigned into a normal group （
n
=12） and a modeling group （
n
=36）. The rats in the modeling group received subcutaneous injection of galactose （350 mg·kg
-1
） combined with immobilization stress daily. After 28 days of modeling， 6 rats in the normal group and 6 rats in the modeling group were sacrificed to examine the modeling results. The successfully modeled rats were assigned into model， estradiol valerate （0.09 mg·kg
-1
）， and low-， medium-， and high-dose （6.39， 12.78， 25.56 g·kg
-1
， respectively） Zishen Tiaogan prescription groups. The intervention lasted for 4 weeks with 6 animals per group. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the estrous cycle and the pathological changes in the ovarian tissue. The ovarian index was calculated. Enzyme-linked immunosorbent assay was employed to measure the serum levels of sex hormones and oxidative stress-related indexes. Western blot and real-time PCR were employed to determine the protein and mRNA levels， respectively， of Nrf2， Keap1 and HO-1 in the ovarian tissue. The positive expression of superoxide dismutase 2 （SOD2） in the ovarian tissue was detected by immunohistochemistry （IHC）.
Results
2
Compared with the normal group， the model group showed reduced follicles in the ovary， loose arrangement of the follicle granule layer， declined levels of anti-Mullerian hormone （AMH） and estradiol （E
2
） in the serum， elevated levels of luteinizing hormone （LH） and follicle-stimu
lating hormone （FSH） （
P
<
0.01）， lowered levels of superoxide dismutase （SOD）， catalase （CAT）， and glutathione （GSH） （
P
<
0.01）， and increased accumulation of malondialdehyde （MDA） （
P
<
0.01）. In addition， the modeling led to up-regulated protein and mRNA levels of Keap1 （
P
<
0.01）， the expression of Nrf2 and HO-1 protein was significantly decreased （
P
<
0.01）， the mRNA expression of Nrf2 was significantly decreased （
P
<
0.05）， the mRNA expression of HO-1 was significantly decreased （
P
<
0.01）， in the ovarian tissue. Compared with model group， the estradiol valerate and low-， medium-， and high-dose Zishen Tiaogan prescription groups showed increases in the ovarian index （
P
<
0.01） and serum E
2
and AMH levels （
P
<
0.01）， declined levels of FSH and LH （
P
<
0.01）， increased follicles in the ovary， elevated levels of SOD， CAT， and GSH， and reduced accumulation of MDA （
P
<
0.05，
P
<
0.01）. Furthermore， these groups showcased down-regulated protein and mRNA levels of Keap1 （
P
<
0.01）， the expression of Nrf2 protein was significantly increased （
P
<
0.01）， the expression level of HO-1 protein was increased （
P
<
0.05，
P
<
0.01）， and increased positive expression of SOD2 （
P
<
0.01）.
Conclusion
2
Zishen Tiaogan prescription can regulate the serum levels of hormones， down-regulate the expression of Keap1， up-regulate the expression of Nrf2， HO-1， and SOD2， enhance the antioxidant capacity， and reduce the peroxidation damage in the ovarian tissue to improve the ovarian reserve function in the rat model of DOR. High-dose Zishen Tiaogan prescription demonstrated the best effect and the mechanism is associated with the regulation of the Keap1/Nrf2/HO-1 pathway.
关键词
Keywords
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