Pharmacodynamic Characteristics and Neuroinflammatory Mechanisms of Ruyi Zhenbaowan in Treating Nociceptive Hypersensitivity and Central Sensitisation of Spinal Cord in Mouse Model of Central Post-stroke Pain

HUANG Aoqing; WANG Wenli; LIU Ying; WANG Hai ping; ZHU Chunyan; LIN Na

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20241743

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Pharmacodynamic Characteristics and Neuroinflammatory Mechanisms of Ruyi Zhenbaowan in Treating Nociceptive Hypersensitivity and Central Sensitisation of Spinal Cord in Mouse Model of Central Post-stroke Pain

更新时间：2024-11-18

- Pharmacodynamic Characteristics and Neuroinflammatory Mechanisms of Ruyi Zhenbaowan in Treating Nociceptive Hypersensitivity and Central Sensitisation of Spinal Cord in Mouse Model of Central Post-stroke Pain
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 30, Issue 24, Pages: 36-46(2024)
- 作者机构：
  
  1.广州中医药大学科技创新中心，广州 510405
  2.中国中医科学院中药研究所，北京 100700
  3.金诃藏药股份有限公司，西宁 810003
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20241743
  CLC： R2-0;R33;R742;R24
- Received：08 September 2024，
  
  Published Online：28 October 2024，
  
  Published：20 December 2024
- 稿件说明：
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黄奥晴,王文丽,刘莹等.如意珍宝丸干预卒中后中枢痛小鼠痛觉过敏及脊髓中枢敏化的药效特点及神经炎症机制[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(24):36-46.

HUANG Aoqing,WANG Wenli,LIU Ying,et al.Pharmacodynamic Characteristics and Neuroinflammatory Mechanisms of Ruyi Zhenbaowan in Treating Nociceptive Hypersensitivity and Central Sensitisation of Spinal Cord in Mouse Model of Central Post-stroke Pain[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(24):36-46.
黄奥晴,王文丽,刘莹等.如意珍宝丸干预卒中后中枢痛小鼠痛觉过敏及脊髓中枢敏化的药效特点及神经炎症机制[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(24):36-46. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241743.

HUANG Aoqing,WANG Wenli,LIU Ying,et al.Pharmacodynamic Characteristics and Neuroinflammatory Mechanisms of Ruyi Zhenbaowan in Treating Nociceptive Hypersensitivity and Central Sensitisation of Spinal Cord in Mouse Model of Central Post-stroke Pain[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(24):36-46. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241743.

摘要

目的

明确如意珍宝丸（RYZBW）干预卒中后中枢痛（CPSP）小鼠痛觉过敏及脊髓中枢敏化的药效特点及神经炎症机制。

方法

SPF级雄性8周龄ICR小鼠，分为假手术组（Sham）、模型组（CPSP）、如意珍宝丸低（RYZBW-L）、中（RYZBW-M）、高（RYZBW-H）剂量组和普瑞巴林组（PGB）。在第1天进行丘脑腹后外侧核Ⅳ型胶原酶注射以构建CPSP模型。第14~17天进行灌胃给药，其中Sham及CPSP给予等体积生理盐水，RYZBW-L/M/H组给予0.303、0.607、1.214 g·kg

-1

如意珍宝丸，PGB给予0.046 g·kg

-1

普瑞巴林；分别于第0、3、4、7、10、14、17天进行机械痛敏检测，第18天取脊髓L

段采用免疫炎症芯片检测炎症因子、酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测CXC型趋化因子配体16（CXCL16）、免疫组化法检测降钙素基因相关肽（cGRP）、荧光双标分析CXCL16、树突状细胞标记物CD11c、巨噬细胞标记物CD68、小胶质细胞标记物TMEM119、内皮细胞标记物CD31、CXCR6及T细胞标记物CD3的表达情况。

结果

与Sham组比较，CPSP组在第3~17天的机械痛阈值显著低于Sham组，具有稳定的痛觉过敏症状。第7天PGB组的机械痛阈值显著高于CPSP组，具有明显镇痛效果（

0.01）。第10~17天，RYZBW-H组的机械痛阈值明显高于CPSP组，展现出稳定的镇痛效果（

0.05）。第17天，如意珍宝丸的镇痛效果呈量效相关（

=0.303 7）；第4~17天，RYZBW-H组机械痛阈值与时间正相关（

=0.111 5），上述结果提示RYZBW的镇痛呈时效相关。第17天CPSP小鼠脊髓背角内中枢敏化标志物cGRP表达量相比于Sham组明显增加（

0.05），RYZBW以剂量依赖的方式将其下调（

=0.500 8），提示如意珍宝丸显著抑制CPSP导致的脊髓中枢敏化。第17天的脊髓炎症芯片结果显示，与CPSP组比较，RYZBW-H组抑制CXCL16表达（

0.01）。基于独立重复样品的ELISA结果表明，如意珍宝丸对CXCL16的蛋白脊髓表达的抑制呈剂量依赖性（

=0.250 4）；免疫荧光双标结果显示，与Sham组比较，CPSP组CD11c阳性的树突细胞内CXCL16表达量增加，CD68阳性细胞数量增加（

0.05），与CPSP组比较，RYZBW将其下调：CD31阳性的内皮细胞、CD68阳性的巨噬细胞、TMEM119阳性的小胶质细胞内，CXCL16表达量均增加，TMEM119阳性的小胶质细胞细数量、胞体面积均显著增加（

0.05）；CD3阳性的T细胞数量（

0.05）及其中CXCR6表达量增加。如意珍宝丸以剂量依赖性抑制内皮细胞、巨噬细胞的激活，减少小胶质细胞、T细胞浸润（

=0.691 4，

=0.551 5，

=0.653 2，

=0.180 6，

=0.287 5，

=0.298 6，

=0.511 6）。

结论

RYZBW可有效缓解CPSP小鼠卒中后中枢痛痛觉过敏及脊髓中枢敏化，其机制与调控CXCL16-CXCR6配体-受体、抑制小胶质细胞及巨噬细胞浸润及激活、树突状细胞、内皮细胞及T细胞活化有关。

Abstract

Objective

To clarify the pharmacodynamic characteristics and neuroinflammatory mechanisms of Ruyi Zhenbaowan （RYZBW） in treating nociceptive hypersensitivity and central sensitisation of spinal cord in the mouse model of central post-stroke pain （CPSP）.

Method

SPF-grade male ICR mice of 8 weeks old were assigned into the sham operation （Sham）， model （CPSP）， low-， medium-， and high-dose （0.303， 0.607 1.214 g·kg

-1

） RYZBW （RYZBW-L， RYZBW-M， and RYZBW-H， respectively）， and pregabalin （PGB， 0.046 g·kg

-1

， positive control） groups. The rat model of CPSP was established by injection of type Ⅳ collagenase into the ventral posterior lateral nucleus of the thalamus on day 1. Rats were administrated with corresponding drugs or normal saline （Sham and CPSP groups） by gavage from day 14 to day 17. The mechanical pain sensitivity test was performed on days 0， 3， 4， 7， 10， 14， 17. On day 18， the L

segment of spinal cord was collected for the detection of inflammatory cytokines by immunoinflammatory microarray， CXC chemokine ligand 16 （CXCL16） by enzyme-linked immunosorbent assay， and calcitonin gene-related peptide （cGRP） by immunohistochemistry. In addition， fluorescence dual-labeling was employed to determine the expression levels of CXCL16， the dendritic cell marker CD11c， the macrophage marker CD68， the microglia marker TMEM119， the endothelial cell markers CD31 and CXCR6， and the T cell marker CD3.

Result

Compared with the Sham group， t

he mechanical pain threshold of the CPSP group was significantly lower than that of the Sham group from day 3 to day 17， with stable hyperalgesia symptoms. On the 7

day， the mechanical pain threshold of the PGB group was significantly higher than that of the CPSP group， with significant analgesic effect （

0.01）. On days 10-17

the mechanical pain threshold of the RYZBW-H group was significantly higher than that of the CPSP group， showing a stable analgesic effect （

0.05）. On the 17

day， the analgesic effect of RYZBW was dose-effect correlated （

=0.303 7）. From day 4 to day 17， the mechanical pain threshold of RYZBW-H group was positively correlated with time （

=0.111 5）. The above results suggested that the analgesia of RYZBW was time-dependent. On the 17 th day， the expression of central sensitization marker cGRP in the spinal dorsal horn of CPSP mice was significantly increased compared with the Sham group （

0.05）， and RYZBW down-regulated it in a dose-dependent manner （

=0.500 8）， suggesting that RYZBW significantly inhibited the central sensitization of the spinal cord caused by CPSP. The results of spinal cord inflammation chip on the 17

day showed that compared with CPSP group， RYZBW-H group inhibited CXCL16 expression （

0.01）.The results of ELISA based on independent repeated samples showed that RYZBW inhibited the expression of CXCL16 protein in spinal cord in a dose-dependent manner （

=0.250 4）. The results of immunofluorescence double labeling showed that compared with Sham group

the expression of CXCL16 in CD11c positive dendritic cells in CPSP group increased， and the number of CD68 positive cells increased （

0.05）. Compared with CPSP group， RYZBW down-regulated it: the expression of CXCL16 in CD31 positive endothelial cells， CD68 positive macro

phages and TMEM119 positive microglia increased， and the number and cell body area of TMEM119 positive microglia increased significantly （

0.05）. The number of CD3 positive T cells （

0.05） and the expression of CXCR6 in CD3 positive T cells were increased. RYZBW inhibited the activation of endothelial cells and macrophages in a dose-dependent manner， and reduced the infiltration of microglia and T cells （

=0.691 4，

=0.551 5，

=0.653 2，

=0.180 6，

=0.287 5，

=0.298 6，

=0.511 6）.

Conclusion

RYZBW can effectively alleviate nociceptive hypersensitivity and central sensitisation of the spinal cord in CPSP mice by regulating CXCL16-CXCR-6， inhibiting the infiltration and activation of microglia and macrophages， and the activation of dendritic cells， endothelial cells， and T cells.

关键词

Keywords

references

贾捷登，谢西梅 . 针刺治疗脑卒中后中枢性疼痛作用机制研究进展［J］. 针灸临床杂志， 2023 ， 39 （ 11 ）： 107 - 111 .

朱晓菁，陈燕灵 . 卒中后中枢性神经痛影响因素［J］. 智慧健康， 2024 ， 10 （ 5 ）： 175 - 177， 181 .

王陇德，彭斌，张鸿祺，等 . 《中国脑卒中防治报告2020》概要［J］. 中国脑血管病杂志， 2022 ， 19 （ 2 ）： 136 - 144 .

白洁如，王宇，张伊菲，等 . 针刺治疗卒中后中枢性疼痛作用机制研究进展［J］. 辽宁中医药大学学报， 2024 ， 10 （ 27 ）： 1 - 11 .

VERGNE-SALLE P ， BERTIN P . Chronic pain and neuroinflammation ［J］. Joint Bone Spine ， 2021 ， 88 （ 6 ）： 105222 .

MULLA S M ， WANG L ， KHOKHAR R ， et al . Management of central poststroke pain：Systematic review of randomized controlled trials ［J］. Stroke ， 2015 ， 46 （ 10 ）： 2853 - 2860 .

王旭东，黄佩文，方有莉，等 . 基于循证医学方法评价普瑞巴林超适应证用药情况［J］. 实用药物与临床， 2024 ， 27 （ 8 ）： 578 - 584 .

孙兆祺，徐晓玉，刘志华 . 针灸治疗卒中后丘脑痛选穴规律研究［J］. 世界中医药， 2024 ， 19 （ 17 ）： 2609 - 2615，2620 .

刘莹，王文丽，张国鑫，等 . 双氢青蒿素和普瑞巴林联用对神经病理性疼痛小鼠的干预作用及炎症调控机制［J］. 中国中药杂志， 2024 ， 49 （ 6 ）： 1570 - 1578 .

梁婷钧，张国鑫，刘莹，等 . 双氢青蒿素调控神经-小胶质细胞缓解神经病理性疼痛［J］. 中国实验方剂学杂志， 2023 ， 29 （ 10 ）： 73 - 82 .

刘莹，张国鑫，姚雪敏，等 . 基于gpr37介导的炎症消散研究瘀血痹片对炎症性疼痛小鼠的干预作用［J］. 中国中药杂志， 2024 ： 1 - 10 .

LING S S ， PAN R H ， ZHAN L C ， et al . Ruyi Zhenbao pills for patients with motor and sensory dysfunction after stroke：A double-blinded， randomized placebo-controlled clinical trial ［J］. Chin J Integr Med ， 2022 ， 28 （ 10 ）： 872 - 878 .

舒惠蓉 . 藏药如意珍宝丸联合阿昔洛韦治疗周围性面瘫的临床效果［J］. 中国民族医药杂志， 2023 ， 29 （ 12 ）： 13 - 14 .

增太吉 . 三叉神经痛采用藏药如意珍宝丸治疗的价值［J］. 世界最新医学信息文摘， 2019 ， 19 （ 68 ）： 242 - 243 .

LIU Y ， ZHANG G ， ZHU C ， et al . The analgesic effects of Yu-Xue-Bi tablet （YXB） on mice with inflammatory pain by regulating LXA4-FPR2-TRPA1 pathway ［J］. Chin Med ， 2024 ， 19 （ 1 ）： 104 .

贾可欣，仲格嘉，朱春燕，等 . 如意珍宝丸对小鼠丘脑出血后中枢痛的干预作用［J］. 中国实验方剂学杂志， 2022 ， 28 （ 16 ）： 82 - 89 .

胥明珠，李怀平，马兆臣，等 . “药效-靶标-成分-药动”多维关联模式下的如意珍宝丸药效物质基础辨识［J］. 中国实验方剂学杂志， 2024 ， doi： 10.13422/j.cnki.syfjx.20250261 http://dx.doi.org/10.13422/j.cnki.syfjx.20250261 .

王文丽，张国鑫，刘莹，等 . 如意珍宝丸干预出血性脑卒中小鼠继发性脑损伤及中枢痛的作用及免疫炎症机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2024 ， doi： 10.13422/j.cnki.syfjx.20240644 http://dx.doi.org/10.13422/j.cnki.syfjx.20240644 .

李佳豪，田聪敏，池宏宇，等 . 瘀血痹片通过抑制外周炎症缓解慢性炎性痛小鼠痛觉过敏及足肿胀［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 10 ）： 31 - 37 .

YANG C ， HU Z ， DROLKAR G ， et al . Tibetan medicine Ruyi Zhenbao pill ameliorates neuropathic pain by inhibiting the CXCL10-CXCR3 pathway in spinal cord of spinal nerve ligation model ［J］. J Ethnopharmacol ， 2024 ， 323 ： 117653 .

ZHANG G ， TIAN C ， LIANG T ， et al . The analgesic properties of Yu-Xue-Bi tablets in the inflammatory pain mice：By the inhibition of CCL3-mediated macrophage transmigration into the spinal cord ［J］. J Ethnopharmacol ， 2022 ， 289 ： 115051 .

张艳玲，陈康宁，邵淑琴，等 . 采用ⅳ型胶原酶构建大鼠脑出血模型［J］. 第三军医大学学报， 2002 ， 12 ： 1394 - 1395 .

ZHANG Z L ， WANG Z T ， SHI J ， et al . Tetrandrine attenuates SNI-induced mechanical allodynia by inhibiting spinal CKLF1 ［J］. Neuropharmacology ， 2023 ， 238 ： 109673 .

王宁宁，王丽琨，伍国锋 . 小胶质细胞在脑出血后继发性脑损害中的双重作用［J］. 中国脑血管病杂志， 2020 ， 17 （ 8 ）： 491 - 496 .

陶毅航，雷静，尤浩军 . 卒中后中枢性疼痛的病理生理机制及治疗［J］. 中国疼痛医学杂志， 2023 ， 29 （ 5 ）： 371 - 375 .

LA PORTA C ， LARA-MAYORGA I M ， NEGRETE R ， et al . Effects of pregabalin on the nociceptive， emotional and cognitive manifestations of neuropathic pain in mice ［J］. Eur J Pain （London， England）， 2016 ， 20 （ 9 ）： 1454 - 1466 .

HONG J S W ， ATKINSON L Z ， AL-JUFFALI N ， et al . Gabapentin and pregabalin in bipolar disorder， anxiety states， and insomnia：Systematic review， Meta-analysis， and rationale ［J］. Mol Psychiatry ， 2022 ， 27 （ 3 ）： 1339 - 1349 .

武慧超，梁军，毛萌，等 . 藏药治疗脑缺血性疾病的实验研究进展［J］. 环球中医药， 2019 ， 12 （ 9 ）： 1434 - 1439 .

陈可点，马兆臣，蔡冰冰，等 . 基于UHPLC-Q exactive orbitrap HRMS的如意珍宝丸体内外成分分析［J］. 中国实验方剂学杂志， 2024 ， doi： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241443 http://dx.doi.org/10.13422/j.cnki.syfjx.20241443 .

WANG X Q ， ZHOU W J ， HOU X X ， et al . Trophoblast-derived CXCL16 induces M2 macrophage polarization that in turn inactivates NK cells at the maternal-fetal interface ［J］. Cell Mol Immunol ， 2018 ， 15 （ 12 ）： 1038 - 1046 .

BAO N ， FU B ， ZHONG X ， et al . Role of the CXCR6/CXCL16 axis in autoimmune diseases ［J］. Int Immunopharmacol ， 2023 ， 121 ： 110530 .

MA A ， YANG S ， WANG Y ， et al . Increase of serum CXCL16 level correlates well to microembolic signals in acute stroke patients with carotid artery stenosis ［J］. Clinica Chimica Acta ， 2016 ， 460 ： 67 - 71 .

王少冰，杨波，韩德平，等 . 树突状细胞与中枢神经系统炎症性疾病［J］. 现代免疫学， 2008 ， 28 （ 1 ）： 83 - 86 .

DE VLAMINCK K ， VAN HOVE H ， KANCHEVA D ， et al . Differential plasticity and fate of brain-resident and recruited macrophages during the onset and resolution of neuroinflammation ［J］. Immunity ， 2022 ， 55 （ 11 ）： 2085 - 2102 .

SPILJAR M ， KUCHROO V K . Metabolic regulation and function of T helper cells in neuroinflammation ［J］. Semin Immunopathol ， 2022 ， 44 （ 5 ）： 581 - 598 .

TAKATA F ， NAKAGAWA S ， MATSUMOTO J ， et al . Blood-brain barrier dysfunction amplifies the development of neuroinflammation：Understanding of cellular events in brain microvascular endothelial cells for prevention and treatment of BBB dysfunction ［J］. Front Cell Neuro ， 2021 ， 15 ： 661838 .

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