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Yishen Tongluo Prescription Ameliorates Oxidative Stress Injury in Mouse Model of Diabetic Kidney Disease via Nrf2/HO-1/NQO1 Signaling Pathway
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 31, Issue 5, Pages: 41-51(2025)
- 作者机构：
1.北京中医药大学 东直门医院，北京 100029
2.北京中医药大学 中医内科学教育部重点实验室， 北京 100029
3.北京普仁医院，北京 100062
- 作者简介：
- 基金信息：
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20241801
CLC： R285;R289;R259Received：16 September 2024，
Accepted：19 November 2024，
Published Online：21 November 2024，
Published：05 March 2025
- 稿件说明：
移动端阅览
张轶斐,白雪慧,曹梓静等.基于Nrf2/HO-1/NQO1信号通路探讨益肾通络方改善糖尿病肾脏病小鼠氧化应激损伤的机制[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(05):41-51.
ZHANG Yifei,BAI Xuehui,CAO Zijing,et al.Yishen Tongluo Prescription Ameliorates Oxidative Stress Injury in Mouse Model of Diabetic Kidney Disease via Nrf2/HO-1/NQO1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(05):41-51.
张轶斐,白雪慧,曹梓静等.基于Nrf2/HO-1/NQO1信号通路探讨益肾通络方改善糖尿病肾脏病小鼠氧化应激损伤的机制[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(05):41-51. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241801.
ZHANG Yifei,BAI Xuehui,CAO Zijing,et al.Yishen Tongluo Prescription Ameliorates Oxidative Stress Injury in Mouse Model of Diabetic Kidney Disease via Nrf2/HO-1/NQO1 Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(05):41-51. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241801.
摘要
目的
2
基于核因子E
2
相关因子2/血红素加氧酶-1/NAD（P）H醌还原酶1（Nrf2/HO-1/NQO1）信号通路，探讨益肾通络方对糖尿病肾脏病（DKD）小鼠氧化应激损伤的干预作用及机制。
方法
2
采用SPF级雄性C57BL/6小鼠进行研究，分为正常组10只，造模组50只，采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立DKD模型。造模组随机分为模型组、司美格鲁肽组（40 μg·kg
-1
）、益肾通络方高、中、低剂量组（18.2、9.1、4.55 g·kg
-1
），每组10只，连续给药12周。留取标本后测定小鼠血糖、24 h尿蛋白；计算肾脏指数（KI）；检测肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）；苏木素-伊红（HE）、过碘酸-希夫（PAS）、过碘酸-六胺银（PASM）、马松（Masson）染色观察各组肾组织病理改变；酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒检测
β
2
-微球蛋白（
β
2
-MG）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、肾损伤分子-1（KIM-1）、肝脂肪酸结合蛋白（L-FABP）、一氧化氮合酶（NOS）、谷胱甘肽（GSH）、总抗氧化能力（T-AOC）和8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）表达水平；免疫组化染色观察Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）、丙二醛（MDA）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Nrf2/HO-1/NQO1 mRNA和蛋白表达水平。
结果
2
与正常组比较，DKD模型组小鼠血糖、24 h尿蛋白水平、KI、SCr、BUN、ALT升高，肾小球肥大、肾小管扩张、基底膜增厚、系膜增生、胶原沉积，
β
2-MG、NGAL、KIM-1、L-FABP水平增高，NOS、8-OHdG水平升高，GSH、T-AOC水平降低，MDA、Keap1表达增多，Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC均表达降低（
P
<
0.05）；与模型组比较，司美格鲁肽及益肾通络方组中、高剂量组血糖、24 h尿蛋白水平、KI、SCr、BUN、ALT降低，肾组织病理损伤有不同程度的改善，
β
2-MG、NGAL、KIM-1、L-FABP表达降低，NOS、8-OHdG水平降低，GSH、T-AOC水平升高，MDA、Keap1表达减少，Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC表达增加（
P
<
0.05）。
结论
2
益肾通络方可调控Nrf2/HO-1/NQO1信号通路对抗氧化应激，减轻肾小管损伤，从而实现DKD的肾脏保护作用。
Abstract
Objective
2
To investigate the effect and mechanism of Yishen Tongluo prescription in protecting mice from oxidative stress injury in diabetic kidney disease （DKD） via the nuclear factor erythroid 2-related factor 2 （Nrf2）/heme oxygenase-1 （HO-1）/NAD（P）H quinone oxidoreductase 1 （NQO1） signaling pathway.
Methods
2
Specific pathogen-free （SPF） male C57BL/6 mice were assigned into a control group （
n
=10） and a modeling group （
n
=50）. The DKD model was established by intraperitoneal injection of streptozotocin. The mice in the modeling group were randomized into a model group， a semaglutide （40 μg·kg
-1
） group， and high-， medium-， and low-dose （18.2， 9.1， 4.55 g·kg
-1
， respectively） Yishen Tongluo prescription groups， with 10 mice in each group. The treatment lasted for 12 weeks. Blood glucose and 24-h urine protein levels were measured， and the kidney index （KI） was calculated. Serum levels of creatinine （SCr）， blood urea nitrogen （BUN）， alanine aminotransferase （ALT）， and aspartate aminotransferase （AST） were assessed. The pathological changes in the renal tissue were evaluated by hematoxylin-eosin， periodic acid-Schiff， periodic acid-silver methenamine， and Masson’s trichrome staining. Enzyme-linked immunosorbent assay kits were used to measure the levels of
β
2-microglobulin （
β
2-MG）， neutrophil gelatinase-associated lipocalin （NGAL）， kidney injury molecule-1 （KIM-1）， liver fatty acid-binding protein （L-FABP）， nitric oxide synthase （NOS）， glutathione （GSH）， total antioxidant capacity （T-AOC）， and 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine （8-OHdG）. Immunohistochemical staining was performed to examine the expression of Kelch-like ECH-associated protein 1 （Keap1） and malondialdehyde （MDA）. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (Real-time PCR） and Western blot were employed to determine the mRNA and protein levels， respectively， of factors in the Nrf2/HO-1/NQO1 signaling pathway.
Results
2
Compared with the control group， the DKD model group showed rises in blood glucose， 24-h urine protein， KI， SCr， BUN， and ALT levels， along with glomerular hypertrophy， renal tubular dilation， thickened basement membrane， mesangial expansion， and collagen deposition. Additionally， the model group showed elevated levels of
β
2-MG， NGAL， KIM-1， L-FABP， NOS， and 8-OHdG， lowered levels of GSH and T-AOC， up-regulated expression of MDA and Keap1， and down-regulated expression of Nrf2， HO-1， NQO1， and glutamate-cysteine ligase catalytic subunit （GCLC） （
P
<
0.05）. Compared with the model group， the semaglutide group and the medium- and high-dose Yishen Tongluo prescription groups showed reductions in blood glucose， 24-h urine protein， KI， SCr， BUN， and ALT levels， along with alleviated pathological injuries in the renal tissue. In addition， the three groups showed lowered levels of
β
2-MG， NGAL， KIM-1， L-FABP， NOS， and 8-OHdG， elevated levels of GSH and T-AOC， down-regulated expression of MDA and Keap1， and up-regulated expression of Nrf2， HO-1， NQO1， and GCLC （
P
<
0.05）.
Conclusion
2
Yishen Tongluo prescription exerts renoprotective effects in the mouse model of DKD by modulating the Nrf2/HO-1/NQO1 signaling pathway， mitigating oxidative stress， and reducing renal tubular injuries.
关键词
Keywords
references
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