Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells

YANG Yuting; WU Dongsheng; CAO Hui; ZHANG Yu; XIE Nianjia; ZOU Bo; CHEN Daguang; LIU Erle; LU Yi; LYU Zhaowen

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20250404

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Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells

更新时间：2025-05-30

- Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells
  增强出版
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 31, Issue 13, Pages: 62-69(2025)
- 作者机构：
  
  1.湖南中医药大学第一附属医院，长沙 410007
  2.宁乡市人民医院，湖南宁乡 410600
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20250404
  CLC： R285;R289;R259
- Received：19 December 2024，
  
  Published Online：06 March 2025，
  
  Published：05 July 2025
- 稿件说明：
移动端阅览
阳玉婷,吴东升,曹晖等.芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(13):62-69.

YANG Yuting,WU Dongsheng,CAO Hui,et al.Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(13):62-69.
阳玉婷,吴东升,曹晖等.芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(13):62-69. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20250404.

YANG Yuting,WU Dongsheng,CAO Hui,et al.Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(13):62-69. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20250404.

摘要

目的

探讨不同浓度芍药汤含药血清激活肿瘤坏死因子（TNF）受体超族成员6（Fas）/Fas配体（FasL）信号通路抑制细胞凋亡对脂多糖（LPS）诱导人结直肠上皮腺癌细胞（Caco-2）炎症的影响。

方法

将Caco-2细胞分为对空白组，模型组（LPS，10 mg·L

-1

），芍药汤含药血清5%、10%、15%、20%组，Fas抑制剂组（KR-33493，20 mmol·L

-1

）。除空白组外，其他组用10 mg·L

-1

LPS刺激培养24 h制备细胞炎症模型，造模成功后，空白组、Fas抑制剂组和模型组给予空白血清，芍药汤含药血清组分别加入相应浓度含药血清处理24 h，Fas抑制剂组给予KR-33493预处理1 h。细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测各组细胞存活率；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测白细胞介素-6（IL-6）、IL-1

、肿瘤坏死因子-

（TNF-

）含量；流式细胞术检测细胞凋亡水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测组织Fas、FasL、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Caspase-9、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测组织Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。

结果

实验结果中，与空白组比较，模型组细胞存活率显著下降（

0.01）；与模型组比较，5%芍药汤含药血清组差异无统计学意义，10%、15%、20%芍药汤含药血清组细胞存活率显著增高（

0.01）。由于5%芍药汤含药血清组与模型组差异无统计学意义，故后续研究选取10%、15%、20%芍药汤含药血清进行实验。与空白组比较，模型组IL-6、IL-1

、TNF-

含量均显著增高（

0.01）；细胞凋亡率显著升高（

0.01），模型组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均升高（

0.01），Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低（

0.01）；与模型组比较，Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL-1

、TNF-

含量均显著降低（

0.01），Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率显著降低（

0.01），Fas抑制剂组及各芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均明显降低（

0.05，

0.01），Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高（

0.05，

0.01），与10%芍药汤含药血清组比较，15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL-1

、TNF-

含量均降低（

0.05，

0.01），15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率明显降低（

0.05，

0.01），15%、20%芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均降低（

0.05，

0.01），Bcl-2蛋白及mRNA表达水平升高（

0.05，

0.01）。

结论

芍药汤含药血清能减少LPS干预下Caco-2细胞炎症因子的含量，下调Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白及mRNA表达水平，上调Bcl-2蛋白及mRNA表达水平，其作用机制可能与其调控Fas/FasL信号通路，抑制溃疡性结肠炎肠上皮细胞凋亡有关。

Abstract

Objective

To investigate the effects of different concentrations of Shaoyaotang-containing serum on lipopolysaccharide （LPS）-induced inflammation of human colorectal adenocarcinoma （Caco-2） cells by inhibiting apoptosis via activating the tumor necrosis factor （TNF） receptor superfamily member 6 （Fas）/Fas ligand （FasL） pathway.

Methods

Caco-2 cells were allocated into blank， model （LPS， 10 mg·L

-1

）， Shaoyaotang-containing serum （5%， 10%， 15%， 20%）， and Fas inhibitor （KR-33493， 20 mmol·L

-1

） groups. Except the blank group， the other groups were stimulated with 10 mg·L

-1

LPS for 24 h for the modeling of inflammation. After successful modeling， the blank， Fas inhibitor， and model groups were treated with blank serum， and the Shaoyaotang-containing serum groups were treated with the serum samples at corresponding concentrations for 24 h. The Fas i

nhibitor group was subjected to KR-33493 pretreatment for 1 h. Cell proliferation and viability were examined by the cell-counting kit-8 （CCK-8） method. The levels of interleukin （IL）-6， IL-1

， and TNF-

were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Apoptosis was detected by flow cytometry. The protein and mRNA levels of Fas， FasL， cysteinyl aspartate-specific proteinase （Caspase）-3， Caspase-9， B-cell lymphoma 2 （Bcl-2）， and Bcl-2-associated X protein （Bax） were determined by Western blot and Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）， respectively.

Results

Compared with the blank group， the model group presented a decrease in cell survival rate （

0.01）. Compared with that in the model group， the cell survival rate showed no significant change in the 5% Shaoyaotang-containing serum group but increased in the 10%， 15%， and 20% Shaoyaotang-containing serum groups （

0.01）. Since there was no statistical difference between the 5% Shaoyaotang-containing serum group and the model group， 10%， 15%， and 20% Shaoyaotang-containing sera were selected for the follow-up study. Compared with the blank group， the model group showed risen levels of IL-6， IL-1

， and TNF-

（

0.01）， an increased apoptosis rate （

0.01）， up-regulated protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax （

0.01）， and down-regulated protein and mRNA levels of Bcl-2 （

0.01）. Compared with the model group， the Fas inhibitor group and the 10%， 15%， and 20% Shaoyaotang-containing serum groups showed declined levels of IL-6， IL-1

， and TNF-

（

0.01）， decreased apoptosis rates （

0.01）， down-regulated protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax （

0.05，

0.01）， and up-regulated protein and mRNA levels of Bcl-2 （

0.05，

0.01）. In addition， the 15% and 20% Shaoyaotang-containing serum groups had lower levels of IL-6， IL-1

， and TNF-

（

0.05，

0.01）， lower apoptosis rates （

0.05，

0.01）， lower protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax （

0.05，

0.01）， and higher protein and mRNA levels of Bcl-2 （

0.05，

0.01） than the 10% Shaoyaotang-containing serum group.

Conclusion

The Shaoyaotang-containing serum can reduce the content of inflammatory factors in Caco-2 cells， down-regulate the protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax， and up-regulate the protein and mRNA levels of Bcl-2 under the intervention of LPS by regulating the Fas/FasL pathway and inhibiting the apoptosis of intestinal epithelial cells in ulcerative colitis.

关键词

Keywords

references

LE B C ， HONAP S ， PEYRIN-BIROULET L . Ulcerative colitis ［J］. Lancet ， 2023 ， 402 （ 10401 ）： 571 - 584 .

HOU W B ， SUN W J ， ZHANG X W ， et al . Five-flavor sophora flavescens enteric-coated capsules for ulcerative colitis：A systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials ［J］. Evid Based Complement Alternat Med ， 2022 ， 2022 ： 9633048 .

XIE C ， QUAN R ， HONG F ， et al . The culprit of mesalamine intolerance：Case series and literature review ［J］. BMC Gastroenterol ， 2019 ， 19 （ 1 ）： 138 .

DU L ， HA C . Epidemiology and pathogenesis of ulcerative colitis ［J］. Gastroenterol Clin North Am ， 2020 ， 49 （ 4 ）： 643 - 654 .

XU X ， LAI Y ， HUA Z . Apoptosis and apoptotic body：Disease message and therapeutic target potentials ［J］. Biosci Rep ， 2019 ， 39 （ 1 ）： BSR20180992 .

TUMMERS B ， MARI L ， GUY C ， et al . Caspase-8-dependent inflammatory responses are controlled by its adaptor， FADD， and necroptosis ［J］. Immunity ， 2020 ， 52 （ 6 ）： 994 - 1006 .

SCHWARZER R ， JIAO H ， WACHSMUTH L ， et al . FADD and Caspase-8 regulate gut homeostasis and inflammation by controlling MLKL- and GSDMD-mediated death of intestinal epithelial cells ［J］. Immunity ， 2020 ， 52 （ 6 ）： 978 - 993 .

MIANO M ， MADEO A ， CAPPELLI E ， et al . Defective FAS-mediated apoptosis and immune dysregulation in gaucher disease ［J］. J Allergy Clin Immunol Pract ， 2020 ， 8 （ 10 ）： 3535 - 3542 .

WANG J ， CAO Z ， WANG P ， et al . Apoptotic extracellular vesicles ameliorate multiple myeloma by restoring fas-mediated apoptosis ［J］. ACS Nano ， 2021 ， 15 （ 9 ）： 14360 - 14372 .

JULIEN O ， WELLS J A . Caspases and their substrates ［J］. Cell Death Differ ， 2017 ， 24 （ 8 ）： 1380 - 1389 .

吴星镝，徐雯 . Caspase家族与干眼症的研究进展［J］. 中华眼视光学与视觉科学杂志， 2021 ， 23 （ 7 ）： 546 - 551 .

WU D S ， CAO H ， CAO X Y ， et al . Research progress on the Caspase family and dry eye syndrome ［J］. Chin J Optom Ophthalmol Visual Sci ， 2021 ， 23 （ 7 ）： 546 - 551 .

吴东升，李嫣红，阳玉婷，等 . 芍药汤通过PPAR γ 调控TGF- β 1 /Smads信号通路对溃疡性结肠炎湿热内蕴证肠纤维化上皮间质转化的影响［J］. 中国中医药信息杂志， 2023 ， 30 （ 11 ）： 94 - 99 .

WU D S ， LI Y H ， YANG Y T ， et al . Effects of Shaoyaotang on epithelial-mesenchymal transition in intestinal fibrosis in ulcerative colitis with damp-heat syndrome through PPAR γ /TGF- β 1 /Smads signaling pathway ［J］. Chin J Inf Tradit Chin Med ， 2023 ， 30 （ 11 ）： 94 - 99 .

吴东升，曹晖，曹晓阳，等 . 芍药汤通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控溃疡性结肠炎水液代谢及肠上皮通透性的作用机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2023 ， 29 （ 9 ）： 53 - 60 .

WU D S ， CAO H ， CAO X Y ， et al . Mechanism of Shaoyaotang in regulating water metabolism and intestinal epithelial permeability in ulcerative colitis through cAMP/PKA/CREB signaling pathway ［J］. Chin J Exp Tradit Med Form ， 2023 ， 29 （ 9 ）： 53 - 60 .

吴东升，曹晖，张彧，等 . 基于IL-6/STAT3通路探讨芍药汤对溃疡性结肠炎Th17/Treg平衡的调节机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2023 ， 29 （ 9 ）： 46 - 52 .

WU D S ， CAO H ， ZANG Y ， et al . Shaoyaotang alleviates ulcerative colitis by regulating Th17/Treg balance through IL-6/STAT3 signaling pathway ［J］. Chin J Exp Tradit Med Form ， 2023 ， 29 （ 9 ）： 46 - 52 .

DING X ， HU X ， CHEN Y ， et al . Differentiated Caco-2 cell models in food-intestine interaction study：Current applications and future trends ［J］. Trends Food Sci Technol ， 2021 ， 107 ： 455 - 465 .

WU X X ， HUANG X L ， CHEN R R ， et al . Paeoniflorin prevents intestinal barrier disruption and inhibits lipopolysaccharide （LPS）-induced inflammation in Caco-2 cell monolayers ［J］. Inflammation ， 2019 ， 42 （ 6 ）： 2215 - 2225 .

史瑞，李军祥，沈洪，等 . 溃疡性结肠炎中医诊疗专家共识（2023）［J］. 中华中医药杂志， 2024 ， 39 （ 1 ）： 288 - 296 .

SHI R ， LI J X ， SHEN H ， et al . Experts consensus on traditional Chinese medicine diagnosis and treatment of ulcerative colitis（2023）［J］. China J Tradit Chin Med Pharm ， 2024 ， 39 （ 1 ）： 288 - 296 .

李嫣红，吴东升，芦易，等 . 芍药汤及其加减方治疗溃疡性结肠炎的研究进展［J］. 中国实验方剂学杂志， 2023 ， 29 （ 9 ）： 37 - 45 .

LI Y H ， WU D S ， LU Y ， et al . Shaoyaotang and its modified formulas in treatment of ulcerative colitis：A review ［J］. Chin J Exp Tradit Med Form ， 2023 ， 29 （ 9 ）： 37 - 45 .

LIU C ， ZENG Y ， WEN Y ， et al . Natural products modulate cell apoptosis：A promising way for the treatment of ulcerative colitis ［J］. Front Pharmacol ， 2022 ， 13 ： 806148 .

LIU B ， ZHENG X ， LI J ， et al . Revealing mechanism of Caulis Sargentodoxae for the treatment of ulcerative colitis based on network pharmacology approach ［J］. Biosci Rep ， 2021 ， 41 （ 1 ）： BSR20204005 .

SHEN J ， CHENG J Z ， ZHU S G ， et al . Regulating effect of baicalin on IKK/IKB/NF- κ B signaling pathway and apoptosis-related proteins in rats with ulcerative colitis ［J］. Int Immunopharmacol ， 2019 ， 73 ： 193 - 200 .

EISSA N ， HUSSEIN H ， DIARRA A ， et al . Semaphorin 3E regulates apoptosis in the intestinal epithelium during the development of colitis ［J］. Biochem Pharmacol ， 2019 ， 166 ： 264 - 273 .

SHARMA S ， CARMONA A ， SKOWRONEK A ， et al . Apoptotic signalling targets the post-endocytic sorting machinery of the death receptor Fas/CD95 ［J］. Nat Commun ， 2019 ， 10 （ 1 ）： 3105 .

JAN R ， CHAUDHRY G . Understanding apoptosis and apoptotic pathways targeted cancer therapeutics ［J］. Adv Pharm Bull ， 2019 ， 9 （ 2 ）： 205 - 218 .

YIN KI ， CUI Y ， SUN T ， et al . Antagonistic effect of selenium on lead-induced neutrophil apoptosis in chickens via miR-16-5p targeting of PIK3R1 and IGF1R ［J］. Chemosphere ， 2020 ， 246 ： 125794 .

LIU H P ， SU D MI ， ZHANG J L ， et al . Improvement of pharmacokinetic profile of TRAIL via trimer-tag enhances its antitumor activity in vivo ［J］. Sci Rep ， 2017 ， 7 （ 1 ）： 8953 .

FRITSCH M ， GÜNTHER S ， SCHWARZER R ， et al . Caspase-8 is the molecular switch for apoptosis，necroptosis and pyroptosis ［J］. Nature ， 2019 ， 575 （ 7784 ）： 683 - 687 .

曹思齐，王凤仪，汤胜男，等 . 芍药汤对大肠湿热型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中CD14，FADD，Caspase-8表达的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2021 ， 27 （ 5 ）： 1 - 7 .

CAO S Q ， WANG F Y ， TANG S N ， et al . Effect of Shaoyaotang on expressions of CD14， FADD and Caspase-8 in colonic tissues of rats with large intestinal damp-heat syndrome of ulcerative colitis ［J］. Chin J Exp Tradit Med Form ， 2021 ， 27 （ 5 ）： 1 - 7 .

TAN Y ， ZHANG W ， WU H Y ， et al . Effects of emodin on intestinal mucosal barrier by the upregulation of miR-218a-5p expression in rats with acute necrotizing pancreatitis ［J］. Int J Immunopathol Pharmacol ， 2020 ， 34 ： 2058738420941765 .

WANG M F ， DONG Y P ， WU J ， et al . Baicalein ameliorates ionizing radiation-induced injuries by rebalancing gut microbiota and inhibiting apoptosis ［J］. Life Sci ， 2020 ， 261 ： 118463 .

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