مركب الاعشاب الصيني YTK عن طريق التلاعب بالميثيلة m6A قاد عملية تنظيف الخلايا ونشاطها لمعالجة مرض الكلى السكري

LI Keying ,  

YU Jiaxiang ,  

ZHANG Hanwen ,  

SHI Yan ,  

WU Yi ,  

WANG Yilin ,  

CHENG Yuefeng ,  

ZHANG Wenshun ,  

摘要

الهدف من هذه الدراسة هو مراقبة الآثار الناجمة عن علاج مركب الأعشاب الصيني يي تانغ كان فانغ (YTK) بالاشراف على تعديلات التشابه ذاتي لميثيلN6-adenosine (m6A) والتي تحفز تنظيف الخلايا وتعزز علاج مرض الكلى السكري (DKD)، وذلك بهدف استكشاف آلية العمل المحتملة لعلاج YTK لـ DKD. تم اختيار 45 من فئران db/db (نموذج DKD) المضمنة SPF ذات 16 أسبوعًا لتكون مجموعة التجارب، في حين تم اختيار 9 من الفئران db/m كمجموعة سلبية. مع استخدام جدول الأرقام العشوائية، تم تقسيم الفئران في مجموعة التجارب إلى مجموعة النموذج ومجموعة YTK منخفضة ومتوسطة وعالية (14،463، 28،925، 57،850 كجم-1. d-1) ومجموعة Non-germ (2،6 ملغ. kg -1. d-1)، وأعطيت مستخلصات الماء ل YTK و Nafenlone للفئران لمدة 8 أسابيع. تم استخدام طريقة الاختبار المناعي المقترن بالإنزيم (ELISA) لاختبار مستويات الأيض النيوترفيلية للبروتين الناقل للدهون الأنسجة. تم استخدام جهاز الكيمياء الحيوي الآلي لاختبار اليوريا في الدم (UREA)، الكرياتينين الدم (SCr)، حمض البولين (UA) ومعدل بروتين البولين وكرياتينين (UACR) لتقييم الضرر الكلوي. تمت دراسة أنسجة الكلية الفئران بعد العزل باستخدام تلوين الهيماتوكسيلين والآزورانين (HE) لمراقبة التغيرات في الشكل المورفولوجي لأنسجة الكلى. باستخدام أسلوب تحديد نهاية العلامة (TUNEL)، تم مراقبة النسبة المئوية للخلايا الميتة في أنسجة الكلى للفئران. تم استخدام أسلوب المنظمة المناعية المشتركة (TLA) لاختبار القيم الطيفية المتوسطة للبروتين الشبيه ميثيل ترانسفيريز 3 (METTL3)، بروتين تشبه ميثيل ترانسفيريز 14 (METTL14)، بروتين غشائي ذاتي الهضم الحمضي الإندوبلازموي 2A (LAMP2A)، بروتين السلسلة الخفيفة المرتبطة بأنابيب الكواكب 3-II (LC 3 II) وبروتين المستشعر النوبين 3 (NLRP3) في أحتهاء الكلى للفئران. تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل بالزمن الحقيقي (PCR) المتحقق منه لاختبار أيض، بروتين تشبه ميثيل ترانسفيريز 3 (METTL3)، بروتين تشبه ميثيل ترانسفيريز 14 (METTL14)، بروتين دهيدروجيناز البلازما67 2A (LAMP2A)، بروتين سلسلة 3 II (LC3 II)، بروتين التهجين 1 (p62)، بروتين الرائفة للإناء حمض النوكليوتيد N6-methyladenosine RNA( YTHDF3)، بروتين الحرارة الحرفي 70 (HSP70)، بروتين الحرارة الحرفية 90α (HSP90AA1). وبعد 8 أسابيع من التدخل بالأدوية، حدث ارتفاع ملحوظ في مستويات بروتين NGAL، UREA، SCr، UA في الدم (P<0.01)، إضافة إلى زيادة ملحوظة في مستويات اييس RACR، NGAL في البول (P<0,.01)، تغييرات في هيكلية الخلايا والانسجة الكلوية وكمية التحلل الخلوي كما أظهر زيادة ملحوظة في البروتينات METTL3، METTL14، NLRP3، HSP 70 في الانسجة الكلوية وانخفاض ملحوظ في البروتينات لـ LAMP 2A، LC 3 II في الانسجة الكلوية (P<0.01)اضافة إلى ارتفاع ملحوظ في بروتينات METTL3، METTL14، P62، HSP90AA1 وانخفاض ملحوظ في بروتينات YTHDF3، LAMP2A، LC 3 II، HSP 90AA1 في الانسجة الكلوية (P<0.01). علاوة على ذلك، في مقارنة مع مجموعة النموذج، أدى تناول الفئران للأدوية إلى تقليل ملحوظ في مستويات بروتينات NGAL، UREA، SCr، UA في الدم (P<0.01) وكذلك تقليل في مستويات اييس RACR، NGAL في البول (P<0,.01)، تقليل في تغييرات في هيكلية الخلايا والانسجة الكلوية وكمية التحلل الخلوي كما أظهر انخفاض ملحوظ في أعداد الخلايا الموجبة للموت في الخلايا الكلوية (P<0.01)، تقليل في بروتينات METTL3، METTL14، NLRP3 وزيادة ملحوظ لبتينات LAMP2A، LC 3 II في الانسجة الكلوية (P<0.01) وتقليل في بروتينات METTL3، METTL14، P62، HSP90AA1 وارتفاع ملحوظ في بروتينات YTHDF3، LAMP2A، LC 3 II، HSP 90AA1 في الانسجة الكلوية (P<0.01) . يتمثل الاستنتاج الرئيسي في أن مركب الاعشاب الصيني YTK عن طريق التلاعب بالميثيلة m6A قاد عملية تنظيف الخلايا وتحفيزها لمعالجة مرض الكلى السكري، مما يبرز فعالية المركب الاعشاب الصيني.

关键词

مركب الاعشاب الصيني YTK، N6-adenosine (m6A)، تنظيف الخلايا، معالجة الخلايا المستديرة والانبوبية المحتوية على الجدد (CMA)، مرض الكلى السكري (DKD)

阅读全文