دراسة آلية تنظيم سيكواجينين للضرر الناجم عن إصابة خلايا الكبد بـ HCoV-229E بناءً على تحليل ذاتي للميتوكوندريا

SUN Qiyue ,  

BAO Lei ,  

GENG Zihan ,  

ZHAO Ronghua ,  

LI Shuran ,  

CUI Xihe ,  

ZHANG Jingsheng ,  

LIU Xian ,  

XIE Rui ,  

CUI Xiaolan ,  

GUO Shanshan ,  

SUN Jing ,  

摘要

غرض البحث هو دراسة دور السيكواجينين في حماية الخلايا العملاقة الأحادية النواة الليفوكيتية (RAW264.7) من الضرر الناجم عن الإصابة بفيروس الكورونا البشري (HCoV)-229E وآلية هذه الحماية، وذلك لتوفير الأساس التجريبي لتطوير وتطبيق السيكواجينين. وقد تم استخدام تركيزات مختلفة من HCoV-229E للإصابة بالخلايا العملاقة الأحادية النواة الليفوكيتية (RAW264.7)، وقد تم إنشاء نموذج لاصابة الخلوية بفيروس الكورونا. تم تقسيم الخلايا تصادفياً إلى مجموعة طبيعية ومجموعة سيكواجينين (125 ميكرومول / لتر) ومجموعة النموذج (HCoV-229E) ومجموعة HCoV-229E + سيكواجينين (HCoV-229E + سيكواجينين 125 ميكرومول / لتر). تم استخدام اختبار CCK-8 لقياس نسبة البقاء على قيد الحياة للخلايا، وحساب الجرعة اللا مؤذية القصوى لسيكواجينين (CC0)، والجرعة السامة للخلية بنسبة 50٪ (CC50)، وجرعة فعالة بنسبة 50٪ (EC50) للفيروس HCoV-229E للخلايا، ومؤشر العلاج (SI). تم استخدام تلوين Calcein / PI المزدوج لقياس نشاط وسمية الخلايا، وتم استخدام تلوين JC-1 لقياس تغير جهد غشائي الميتوكوندريا (MMP)، وتم تقييم مستوى تحلل ذاتي للميتوكوندريا في المجموعات المختلفة باستخدام تقييم مختلف كيميا. باستخدام مضاعفة تركيز جرعة HCoV-229E، تم تحقيق بنجاح نموذج الخلايا العملاقة الأحادية النواة الليفوكيتية المصابة. كانت جرعة سيكواجينين CC0 125 ميكرومول / لتر، وكانت قيمة CC50 448.25 ميكرومول / لتر؛ كانت الجرعة الفعالة EC50 لفيروس HCoV-229E للخلايا 46.28 ميكرومول / لتر، وكانت أعلى جرعة سامة الممكنة SI 9.68. بالمقارنة مع المجموعة الطبيعية، حدث انخفاض ملحوظ في نسبة البقاء على قيد الحياة للخلايا في المجموعة النموذجية (P<0.01)، وحدث ارتفاع ملحوظ في نسبة الخلايا الميتة (P<0.01)، وكان هناك انخفاض كبير في جهد غشائي الميتوكوندريا (MMP) (P<0.01)، وحدث انخفاض كبير في مستوى تحلل ذاتي للميتوكوندريا (P<0.01)؛ في المقارنة مع المجموعة النموذجية، حدث ارتفاع ملحوظ في نسبة البقاء على قيد الحياة للخلايا بعد التدخل بالسيكواجينين (P<0.01)، وحدث انخفاض كبير في نسبة الخلايا الميتة (P<0.01)، وتحسن بشكل كبير في حالة انخفاض جهد غشائي الميتوكوندريا (MMP) (P<0.01)، وحدث تحسن كبير في مستوى تحلل ذاتي للميتوكوندريا (P<0.01). الاستنتاج: يمكن للسيكواجينين زيادة نسبة البقاء على قيد الحياة للخلايا بعد الإصابة بفيروس HCoV-229E، وربما يكون آلية ذلك مرتبطة بتنشيط تحلل ذاتي للميتوكوندريا، والحفاظ على استقرار جهد غشائي الميتوكوندريا، وتخفيف الإصابة بالميتوكوندريا.

关键词

السيكواجينين; فيروس الكورونا البشري (HCoV)-229E; الخلايا العملاقة الأحادية النواة الليفوكيتية (RAW264.7); تحليل ذاتي للميتوكوندريا; جهد غشائي الميتوكوندريا

阅读全文