الهدف هو دراسة تأثير وآلية مسحوق تايشان بانشي (TSPSP) في قمع تلف الإجهاد التأكسدي لخلايا الأرومة الغاذية البشرية (HTR-8/SVneo)، وفهم آلية علاج TSPSP للإجهاض التلقائي (SA). تم استخدام قاعدة بيانات سريرية (GEO) لتحليل الفرق الجيني في SA وربطه بالإجهاد التأكسدي، وتم استخدام علم الأدوية الشبكية لتصفية المكونات الفعالة لـ TSPSP، وبناء شبكة "دواء صيني - مكون - هدف - مرض" للتنبؤ بآلية عمل TSPSP. تم إجراء تجارب التحقق في المختبر حيث قسمت خلايا الأرومة الغاذية HTR-8/SVneo إلى مجموعة ضابطة، مجموعة نموذج، ومجموعات عبارة عن مصل محمل بـ TSPSP بنسبة 2.5% و5% و10%، ومجموعة مثبط عامل Nrf2 (ML385، 30 ميكرومول/لتر). باستثناء المجموعة الضابطة، أضيف 150 ميكرومول/لتر من H2O2 لتحفيز تلف الإجهاد التأكسدي لمدة 3 ساعات في المجموعات الأخرى لبناء نموذج تلف الخلايا بالأكسدة. بعد تأكيد النجاح في بناء النموذج، أعطيت المجموعة الضابطة والنموذج مصل ضابط بنسبة 10%، وأضيف مصل محمل بالدواء بتركيز مناسب في مجموعات TSPSP، وأضيف 30 ميكرومول/لتر من ML385 إضافي في مجموعة مثبط Nrf2 على أساس 10% من مصل TSPSP. تم زراعة الخلايا في هذه الظروف لمدة 24 ساعة وجمع العينات للفحوصات اللاحقة. تم استخدام اختبار إثراء الخلايا (CCK-8) لقياس نشاط الخلايا، وتجربة خدش لتقييم معدل الهجرة، وقياس الإنزيم المناعي الممتاز (ELISA) لمحتوى مالونديالديهيد (MDA)، Fe2+، وغلوتاثيون (GSH). تم استخدام مسبار الفلورسنت للأكسجين النشط (DCF-DA) لقياس مستويات الأكسجين النشط الداخلي (ROS)، بالإضافة إلى الفحص المناعي الفلوري (IF) والرد الفوري بواسطة البلمرة (PCR) لقياس تعبير البروتين والرنا المرسال لـ KEAP1، Nrf2، FoxO3. كما تم تقييم التعبير البروتيني لـ KEAP1، Nrf2، FoxO3، GPX4، وSOD بواسطة تحليل وصمة البروتين (Western blot). النتائج من قاعدة بيانات GEO (GSE76862 وGSE22490) أظهرت أن جينات KEAP1، Nrf2، وFoxO3 مرتبطة بالمرض؛ وبعد مطابقة مع مسار الإجهاد التأكسدي، تم الحصول على 9 مسارات تتسم بالفرق الملحوظ (P<0.05) منها 3 تضم الجينات المستهدفة Nrf2 وFoxO3. تم تحديد 246 هدفًا لمكونات TSPSP النشطة و2804 أهداف مرتبطة بـ SA، والتقاطعات أظهرت 154 هدفًا محتملاً. أظهر التحليل القمي أن KEAP1 وNrf2 لهم قيمة درجة عالية؛ وأظهر تحليل التخصيب GO وKEGG أن الأهداف المشتركة مرتبطة بشكل رئيسي بالإجهاد التأكسدي ومسار FoxO ومسار MAPK. في التجارب المختبرية، كانت نشاط الخلايا في مجموعة النموذج منخفضة بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة الضابطة (P<0.01)؛ وكانت نشاط الخلايا في مجموعات TSPSP أعلى بشكل ملحوظ مقارنة بمجموعة النموذج (P<0.01)؛ بينما انخفضت إلى حوالي 70% في مجموعة ML385 مقارنة بمجموعة TSPSP 10% (P<0.01). زادت محتويات MDA، Fe2+، وROS وانخفض تعبير GSH بشكل ملحوظ في مجموعة النموذج مقارنة بالمجموعة الضابطة (P<0.01)، كما انخفض معدل الهجرة، وزاد التعبير البروتيني والـ mRNA لـ KEAP1 وFoxO3 (P<0.01)، بينما انخفض التعبير لـ Nrf2، GPX4، وSOD (P<0.01). بالمقارنة مع مجموعة النموذج، انخفضت مستويات MDA، Fe2+، وROS وزاد تعبير GSH ومعدل الهجرة بشكل ملحوظ في مجموعات TSPSP (P<0.01)، وانخفض التعبير لـ KEAP1 وFoxO3 بشكل واضح، وارتفع التعبير لـ Nrf2، GPX4، وSOD (P<0.05، P<0.01). مقارنةً بمجموعة TSPSP 10%، عكس اتجاه المؤشرات في مجموعة ML385 (P<0.05، P<0.01). الاستنتاج: يمكن لـ TSPSP تثبيط تلف الإجهاد التأكسدي لخلايا الأرومة الغاذية الناجم عن H2O2، وقد يكون الآلية متعلقة بتنشيط مسار إشارات KEAP1/Nrf2/FoxO3.

مسحوق تايشان بانشي؛ الإجهاض التلقائي؛ بروتين Kelch المشابه لـ ECH 1 / عامل النووي E2 المرتبط / بروتين الصندوق الأمامي O3 (KEAP1/Nrf2/FoxO3)؛ الأرومة الغاذية الإنسانية؛ تلف الإجهاد التأكسدي