الهدف هو استكشاف آلية تدخل تركيبة الأعشاب الصينية الوحيدة "حمض الرئة التركيبي رقم 2" في التليف الرئوي مجهول السبب، مع التركيز على تأثيره على إجهاد الشبكة الإندوبلازمية، والموت الخلوي المبرمج، والحفاظ على الخلايا الجذعية، والقدرة على التجديد والترميم لخلايا الظهارة من النوع الثاني للحويصلات الهوائية (AT2)، والتحقق من المسار الحديث للنظرية "ضعف القناة الجذرية - ضمور الحويصلات الهوائية". تم استخدام نموذج تليف الرئة للفئران المحفز بواسطة بليومايسين (BLM)، مع وجود مجموعة ضابطة، مجموعة نموذج، مجموعات جرعة منخفضة ومرتفعة من حمض الرئة التركيبي رقم 2 (9.1 و 18.2 جم/كغ) ومجموعة بونيسولون أسيتات (6.5 ملجم/كغ). تم تقييم تغيرات بنية نسيج الرئة وترسب الكولاجين بواسطة تلوين الهيماتوكسيلين والإيوزين (HE) وماسون (Masson)، وتم قياس محتوى هيدروكسى برولين (HYP) باستخدام طريقة الهضم القاعدي، وتم قياس معامل الرئة ومؤشرات وظيفة الرئة. تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي اللحظي (Real-time PCR) لاكتشاف مستويات التعبير mRNA لعوامل التليف ذات الصلة [سلسلة كولاجين النوع الأول α1 (ColⅠa1)، وأكتين العضلات الملساء ألفا (α-SMA)، ومثبط نسيج الميتالوبروتيناز 1 (Timp1)]. تم تقييم الموت الخلوي بواسطة تثبيت الطرف الوسيط لنهاية DNA (TUNEL)، وتم تقييم موت خلايا AT2 بواسطة طريقة التلوين المناعي المزدوج لبروتين السطح SPC وكاسبيز-3، كما تم تقييم إجهاد الشبكة الإندوبلازمية في خلايا AT2 بواسطة التلوين المزدوج لـ SPC وبروتين كيناز R المشابه للشبكة الإندوبلازمية (PERK)، وتمت مراقبة التغيرات في الشبكة الإندوبلازمية والهيكل الدقيق للجسم الحاجز بواسطة الميكروسكوب الإلكتروني النافذ. تم قياس التعبير عن البروتينات الرئيسية في مسار إجهاد الشبكة الإندوبلازمية والموت الخلوي PERK وعامل النسخ المنشط 4 (Atf4) وكاسبيز-3 بواسطة التحليل المناعي المائي (Western blot). تم تحليل قدرة تكاثر خلايا AT2 بواسطة تلوين مزدوج بالمناعية لـ SPC ومستضد Ki-67، وتم تتبع النمط الخلوي (فئران GFP⁺) مع علامة Krt8 لمراقبة الحالة المتوسطة للتمايز، وكذلك ملاحظة تحول خلايا AT2 إلى خلايا الظهارة من النوع الأول للحويصلات الهوائية (AT1). أسفر تحفيز BLM عن تلف بنية نسيج الرئة بوضوح، زيادة ترسب الكولاجين، ارتفاع معامل الرئة، تراجع وظيفة الرئة، وارتفاع عوامل التليف (P<0.01). معالجة جرعة عالية من حمض الرئة التركيبي رقم 2 حسنت بشكل واضح تلف نسيج الرئة واضطرابات الوظيفة، خفضت محتوى HYP (P<0.01)، وخفضت بشكل ملحوظ التعبير عن ColⅠa1، α-SMA، وTimp1 (P<0.01). أظهرت التحليلات apoptotic زيادة في نسبة خلايا TUNEL الإيجابية ومعدل إيجابية Caspase-3 في خلايا AT2 في مجموعة النموذج، في حين خفضت بشكل ملحوظ في مجموعة الجرعة العالية. كان هناك تورم في هيكل الشبكة الإندوبلازمية لخلايا AT2 تحت الميكروسكوب الإلكتروني، ومع العلاج تم الاقتراب إلى الوضع الطبيعي؛ أظهر التلوين للبروتين PERK إجهادًا واضحًا في الشبكة الإندوبلازمية لخلايا AT2 في مجموعة النموذج، وتخفيفا واضحا في مجموعة العلاج. كانت تعبيرات بروتينات إجهاد الشبكة الإندوبلازمية PERK وAtf4 وبروتينات الموت الخلوي Caspase-3 مرتفعة في مجموعة النموذج وكانت تنخفض بشكل كبير بعد العلاج. كانت بنية الجسم الحاجز مضطربة في مجموعة النموذج تحت الميكروسكوب الإلكتروني، وظهرت علامات تعافي في مجموعة العلاج. على مستوى تكاثر خلايا AT2، زادت نسبة خلايا Ki-67⁺SPC⁺ في مجموعة العلاج بشكل ملحوظ (P<0.01). أظهرت تتبع الخلايا زيادة في نسبة خلايا إيجابية للكيراتين 8 والفوسفور الأخضر (Krt8⁺GFP⁺) في مجموعة النموذج مما يشير إلى انسداد التمايز، وانخفضت هذه النسبة بشكل واضح في مجموعة العلاج، مع تحول شكل خلايا GFP⁺ إلى سطحية ممتدة مما يشير إلى استعادة التمايز نحو خلايا AT1. استنتج أن حمض الرئة التركيبي رقم 2 يعزز إصلاح الحويصلات الهوائية ويوقف تقدم التليف الرئوي من خلال تخفيف إجهاد الشبكة الإندوبلازمية، تقليل موت خلايا AT2، استعادة هيكل الجسم الحاجز ووظيفته، تعزيز النشاط التكاثري، وتخفيف انسداد التمايز لتعزيز تحويل خلايا AT2 إلى خلايا AT1. إن آلية العلاج القائمة على الطب الصيني التقليدي "تعزيز القناة الجذرية، تنشيط الدورة الدموية، وتفتيح مجرى الرئة" تتوافق عاليا مع مسار تنظيم الخلايا الجذعية AT2 الحديث، مما يوفر نظرية جديدة وأساسًا تجريبيًا لتدخل الأعشاب الصينية في التليف الرئوي مجهول السبب.

التليف الرئوي مجهول السبب؛ انسداد التجدد؛ الموت الخلوي المبرمج؛ إجهاد الشبكة الإندوبلازمية؛ الخلايا الجذعية؛ القناة الجذرية؛ حمض الرئة التركيبي رقم 2