سائل إعادة التأهيل الجديد يمارس تأثيره المضاد للصدفية في المختبر عن طريق تثبيط التكاثر الخلوي والهجرة وحجب مسار إشاري JAK3/STAT3

LI Shuai ,  

LIU Xuan ,  

TANG Wenyan ,  

WU Zhenqi ,  

CHEN Chunhui ,  

QIU Dadan ,  

XU Yi ,  

ZHANG Chenggui ,  

ZHU Jianquan ,  

ZHU Jiali ,  

摘要

الغرض هو استكشاف النشاط المضاد للصدفية والس mekanism المحتمل لسائل KFX الجديد لإعادة التأهيل (سائل KFX) في المختبر، بهدف توفير أساس تجريبي لتأثير سائل KFX المضاد للصدفية. تم تقسيم خلايا الكيراتين البشرية الخالدة غير المحفزة (خلايا HaCaT) إلى 7 مجموعات، وهي مجموعة التحكم ومجموعات سائل KFX بتركيزات مختلفة (5، 10، 20، 40، 80، 160 جم/لتر). بعد المعالجة بتركيزات مختلفة من سائل KFX، تم استخدام مجموعة اختبار تكاثر الخلايا والنشاط (CCK-8) لاختبار تأثير سائل KFX على تكاثر الخلايا الطبيعية؛ ثم قسمت خلايا HaCaT غير المحفزة إلى 6 مجموعات، وهي مجموعة التحكم ومجموعات rh-IL-17A بجرعات مختلفة (5، 10، 50، 100، 120 جم/لتر). بعد المعالجة بتركيزات مختلفة من السائل البشري المعاد تركيبه للإنترلوكين -17 أ (rh IL-17A)، تم فحص تأثير rh IL-17A على تكاثر الخلايا لاختيار أفضل تركيز تحفيزي؛ بعد ذلك تم تقسيم خلايا HaCaT الطبيعية إلى مجموعة التحكم ومجموعات سائل KFX (5، 10، 20، 40، 80، 160 جم/لتر)، وتم استخدام أفضل تركيز تحفيزي لـ rh IL-17A في بناء نموذج خلايا الصدفية في جميع المجموعات باستثناء مجموعة التحكم، وبعد المعالجة بتركيزات مختلفة من سائل KFX، تم دراسة تأثير سائل KFX على تكاثر خلايا HaCaT الشبيهة بالصدفية؛ أخيراً، تم تقسيم خلايا HaCaT غير المحفزة إلى 6 مجموعات، وهي مجموعة التحكم وrh IL-17A وMTX ومجموعات سائل KFX بتركيزات مختلفة (20، 40، 80 جم/لتر). باستثناء مجموعة التحكم، تم استخدام أفضل تركيز تحفيزي من rh IL-17A لبناء نموذج خلايا الصدفية في جميع المجموعات الأخرى، وبعد المعالجة بأدوية مختلفة، تم قياس مستوى هجرة الخلايا من خلال اختبار الخدوش واستخدام تقنية PCR الكمية الحقيقية باستخدام الفلورة لاختبار التعبير النسخي النسبي لمضاد Ki-67 (Ki67) والبروتينات المرتبطة بالكالسيوم S100A7 وS100A8 وS100A9. تم تقييم النشاط المضاد للصدفية لسائل KFX في المختبر بشكل شامل. من خلال قياس التعبير النسخي النسبي لعوامل الالتهاب مثل إنترلوكين-1β (IL-1β) وإنترلوكين-6 (IL-6) وعامل كيميائي للاتجاه 20 (CXCL-20) في خلايا HaCaT الشبيهة بالصدفية، وكذلك التعبير البروتيني لكيناز التيروزين 3 (JAK3) وفوسفوريلاشن كيناز التيروزين 3 (p-JAK3) وعامل الإشارة والتنشيط النسخي 3 (STAT3) وفوسفوريلاشن عامل الإشارة والتنشيط النسخي 3 (p-STAT3)، تم استكشاف آلية العمل. مقارنة بمجموعة التحكم، أظهر علاج سائل KFX بتركيز 80 جم/لتر بعد 72 ساعة تأثيراً كبيراً على نشاط تكاثر خلايا HaCaT (P <0.05) وعلاج 160 جم/لتر سائل KFX في فترات زمنية مختلفة تأثيراً واضحاً جداً (P <0.01)، ولم تظهر تركيزات أخرى تأثيرات واضحة على شكل الخلايا أو نشاط التكاثر، مما يشير إلى سلامة سائل KFX على خلايا HaCaT وعدم وجود رد فعل ضار واضح؛ مقارنة بمجموعة التحكم، زاد تأثير التكاثر الخلوي بشكل ملحوظ بعد 24 ساعة من علاج خلايا HaCaT بتركيزات مختلفة من rh IL-17A، وكان أقوى تأثير عند 100 ميكروجرام/لتر (P <0.05)، مع كثافة تقارب 100% وشكل طبيعي للخلايا، مما يشير إلى أن 100 ميكروجرام/لتر هو أفضل تركيز لتحفيز تكاثر خلايا HaCaT؛ أظهر علاج سائل KFX لخلايا الصدفية المستحثة بواسطة rh IL-17A أن سائل KFX لا يثبط فقط نشاط تكاثر خلايا HaCaT الشبيهة بالصدفية المستحثة (P <0.01)، بل يقلل بشكل كبير من قدرة الهجرة (P <0.01) وكذلك التعبير النسخي النسبي لـ Ki67 وS100A7 وS100A8 وS100A9 (P <0.01). بالإضافة إلى ذلك، يقلل سائل KFX بشكل ملحوظ من التعبير النسخي النسبي لـ IL-1β وIL-6 وCXCL-20 (P <0.01) ويثبط بشكل كبير الفوسفوريلاشن لبروتينات JAK3 وSTAT3 (P <0.05 و P <0.01). الخلاصة: لا يظهر سائل KFX سمية واضحة لخلايا HaCaT غير المحفزة، ويثبط تكاثر خلايا HaCaT الشبيهة بالصدفية المستحثة بـ rh IL-17A ويقلل من قدرة الهجرة، مما يدل على نشاط مضاد جيد للصدفية في المختبر. ومن المحتمل أن تكون آلية العمل مرتبطة بخفض تعبير عوامل الالتهاب في مسار إشاري JAK3/STAT3 وتثبيط فوسفوريلاشن بروتينات JAK3 وSTAT3.

关键词

الصدفية; سائل إعادة التأهيل الجديد; تكاثر الخلايا; قدرة الهجرة; عوامل الالتهاب; كيناز التيروزين 3 (JAK3)/مسار إشاري عامل الإشارة والتنشيط النسخي 3 (STAT3)

阅读全文