الهدف هو تحسين طريقة استخراج مكونات بوليسكاريد اللفت، وتحليل وتقييم البنية الأولية لمكونات بوليسكاريد اللفت المنفصلة والمنقية (BP-1) وتأثيرها على خفض السكر في أسماك الزبرا المصابة بالسكري. تم استخدام غلة بوليسكاريد اللفت كمؤشر تقييم، واعتمدت طريقة الاستخلاص شبه الحيوية، حيث تم دراسة ثلاثة عوامل وهي نسبة المادة إلى السائل، ووقت الاستخلاص ودرجة حرارة الاستخلاص عبر طريقة العامل الواحد وطريقة بوكس-بيهكن الاستجابية لتحسين عملية الاستخلاص. تم فصل وتنقية BP-1 باستخدام طريقة سيفاج وعمود السيليلوز DEAE-52. تم تحديد البنية وتركيب المجموعات الوظيفية لبوليسكاريد اللفت من خلال الطرق التالية: الطيف الضوئي فوق البنفسجي المرئي (UV)، كروماتوغرافيا الغاز-مطياف الكتلة (GC-MS)، تجربة قرمزي الكونغو، مطياف الأشعة تحت الحمراء بتحويل فورييه (FT-IR) للفحص الأولي للنقاء وتكوين السكريات الأحادية والبنية ثلاثية اللولب والمجموعات الوظيفية. تم استخدام الميكروسكوب الإلكتروني الماسح (SEM) والمجهر القوي الذري (AFM) لمراقبة البنية المجهرية لبوليسكاريد اللفت. قسمت أسماك الزبرا إلى مجموعات: مجموعة التحكم ومجموعات BP-1-1 وBP-1-10 وBP-1-50 وBP-1-200 وBP-1-1000 حيث أضيفت إلى وسائط E3 محلول BP-1 بتركيزات 1 و10 و50 و200 و1000 ملغم/ل لتر، وأجريت تجربة تعريض لمدة 96 ساعة على الأجنة. تم تقييم تأثير BP-1 على أسماك الزبرا من حيث الطراز الظاهري، معدل البقاء، معدل التشوه ومعدل ضربات القلب لتحديد أقصى تركيز تحمل. قسمت الحيوانات التجريبية عشوائياً إلى مجموعات: التحكم، نموذج السكري، BP-1-10 (10 ملغم/ل), BP-1-50 (50 ملغم/ل), BP-1-200 (200 ملغم/ل) حيث تم تحضين مجموعة التحكم في وسط E3، وتم تحفيز نماذج السكري في الأجنة بواسطة 10 غ/ل من الجلوكوز مع 500 ميكرومول/ل من التترازول لمدة 4 أيام، حيث أعطيت المجموعات العلاجية محاليل BP-1 بتركيزات مختلفة، بينما حصلت مجموعتا التحكم والنموذج على محلول ملحي متساوي الحجم. تم قياس محتوى الجلوكوز والإنسولين (INS) باستخدام كواشف اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، وتم فحص تأثيرها على الكبد بواسطة شرائح الأنسجة المصبوغة بصبغة الهيماتوكسيلين والإيوزين (HE)، وتم الكشف عن التعبير الجيني لـ Glucagon, Insa وPCK1 عبر تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي الفوري (PCR). أظهرت النتائج ضبط عوامل العملية المثلى على نسبة المادة إلى السائل 1:40 (جم/مل)، وقت الاستخلاص 66 دقيقة، ودرجة حرارة الاستخلاص 79 درجة مئوية، مع عائد استخراج بوليسكاريد اللفت (10.34±0.96)%. أظهر تحليل UV أن BP-1 لا يحتوي على بروتينات أو أحماض نووية؛ وأظهر تحليل GC-MS أن BP-1 يتكون من ستة سكريات أحادية: الأرابينوز، الرامنوز، الريبوز، المانوز، الجلاكتوز والجلوكوز. أظهرت تجربة قرمزي الكونغو أن التركيب الجزيئي لا يحتوي على بنية ثلاثية اللولب؛ وأظهر تحليل FT-IR وجود روابط α-جليكوسيد الحمض السكري الكربوكسيلي؛ أظهر تحليل SEM بنية غير منتظمة مسطحة وناعمة السطح؛ وأظهر تحليل AFM أن التركيب التجميعي قد يكون ناتجًا عن تشابك سلاسل الجزيئات وتداخل روابط الهيدروجين داخل الجزيئات. تم تحديد أقصى تركيز تحمل لـ BP-1 في 96 ساعة عند 200 ملغم/ل في أسماك الزبرا. أظهرت النتائج الدوائية مقارنة مع مجموعة التحكم، زيادة كبيرة في محتوى الجلوكوز وانخفاض كبير في محتوى الإنسولين (P<0.01) في مجموعة النموذج؛ مقارنة مع مجموعة النموذج، أظهر BP-1-50 انخفاضًا ملحوظًا في محتوى الجلوكوز وزيادة ملحوظة في محتوى الإنسولين (P<0.05). أظهرت الفحوصات النسيجية للكبد أن BP-1 أعطى تأثير إصلاح واضح على أنسجة الكبد المصابة، حيث كانت بنية الكبد في مجموعة BP-1-200 قريبة من الطبيعية مع تجانس خلايا الكبد. أظهرت نتائج PCR أن mRNA لـ Glucagon وPCK1 ارتفع بشكل كبير وانخفض mRNA لـ Insa في مجموعة النموذج مقارنة مع مجموعة التحكم (P<0.01)؛ مقارنة مع مجموعة النموذج، كانت مستويات mRNA لـ Glucagon وPCK1 في مجموعات BP-1-50 وBP-1-200 منخفضة بشكل ملحوظ، بينما ارتفع mRNA لـ Insa بشكل ملحوظ (P<0.01). الاستنتاج أن طريقة الاستخلاص شبه الحيوية تعطي عائد استخراج مرتفع لبوليسكاريد اللفت، مع سهولة التشغيل وتكلفة منخفضة، مما يجعلها مناسبة للإنتاج الصناعي على نطاق واسع. يتكون مكون BP-1 من ست سكرات أحادية، ويحوي روابط α-جليكوسيد والحمض السكري الكربوكسيلي، ويظهر نشاط خافض للسكر وله تأثير حماية على كبد نموذج السكري في أسماك الزبرا المستحثة بالتترازول.

بوليسكاريد اللفت; طريقة الاستخلاص شبه الحيوية; التوصيف البنيوي; النشاط الخافض للسكر; تحسين العملية; السكري