آلية عمل الكيرسيتين في تثبيط الطابع الخبيث لخلايا سرطان الكبد بناءً على مسار تحلل الجلوكوز
摘要
الهدف هو استكشاف تأثير الكيرسيتين على تثبيط خلايا سرطان الكبد (HCC) وآلية عمله المحتملة من خلال مسار تحلل الجلوكوز. تم استخدام تراكيز مختلفة من الكيرسيتين (0~500 ميكرومول/لتر) لمعالجة خلايا Huh-7 و MHCC-97H من HCC، وتم فحص معدل بقاء الخلايا بواسطة اختبار CCK-8 وحساب تركيز التثبيط النصفي للخلايا (IC50) لتحديد نطاق التركيز. قسمت الخلايا إلى مجموعة فارغة، ومجموعة DMSO، ومجموعات تراكيز منخفضة ومتوسطة وعالية من الكيرسيتين، وتم تقييم تكاثر الخلايا والهجرة والاقتحام باستخدام تجارب تشكيل الاستعمار، وتجارب شق الخدش، وتجارب Transwell على التوالي. تم تحليل جينات التعبير التفاضلي (DEGs) من خلال تسلسل RNA (RNA-seq)، وأجريت تحليلات إثراء الوظائف الجينية (GO) ومسارات KEGG، وتم بناء شبكة التفاعل البروتيني (PPI) واستخدام خوارزمية EPC لاختيار الأهداف المحتملة. تم قياس امتصاص الجلوكوز باستخدام مسبار الفلورسنت، وإنتاج اللاكتات بالطريقة الكيميائية، والتعبير عن mRNA والبروتين للمستهدفات المحتملة باستخدام Real-time PCR وWestern blot على التوالي. أظهرت النتائج أن الكيرسيتين يثبط تكاثر خلايا HCC بناءً على التركيز والوقت (p<0.01)، مع قيم IC50 لخلايا Huh-7 عند 231.0، 94.3، و75.4 ميكرومول/لتر بعد 24، 48، و72 ساعة على التوالي، وقيم لخلايا MHCC-97H عند 588.8، 184.1، و132.0 ميكرومول/لتر؛ كما قلل بشكل ملحوظ من تكوين الاستعمار، وعدد الخلايا المهاجرة والمغزولة في تجارب Transwell، ومعدل هجرة الشق (p<0.01)، وقام بتثبيط امتصاص الجلوكوز وإنتاج اللاكتات (p<0.01). كشف RNA-seq عن 821 جين تعبير تفاضلي، منها 399 مرفوعة و422 مخفضة (│log2FC│≥1، p<0.05 المعدل). أظهر التحليل العنقودي وفصل واضح بين العينات؛ عملت تحليلات GO على إثراء DEGs في استجابة نقص الأكسجة، تنظيم مستويات الأكسجين، الأيضات البيروفيتية؛ وتركيزت في المكونات الخلوية مثل مصفوفة خارج خلوية غنية بالكولاجين وجانب الغشاء البلازمي؛ ووظائف جزيئية كالربط بالأحماض الكربوكسيلية وإنزيمات التحطيم (p<0.05). ركزت تحليلات KEGG على تحلل الجلوكوز/التشكل الجديد للجلوكوز، أيض الكربون، ومسار HIF-1 (p<0.05). تم اختيار 6 جينات مركزية لتحلل الجلوكوز (SLC2A1، PKM، PGK1، ENO2، ALDOA، GPI) عبر دمج PPI وخوارزمية EPC. أكدت نتائج Real-time PCR وWestern blot انخفاضًا معتمدًا على التركيز في التعبير عن mRNA والبروتين للجينات الستة في نوعي الخلايا السرطانية (p<0.01). الخلاصة: يتم تثبيط نشاط تحلل الجلوكوز وتكاثر الخلايا، والهجرة، والاقتحام في خلايا HCC عن طريق خفض التعبير عن جينات مركزية مثل SLC2A1 وPKM وPGK1 بواسطة الكيرسيتين، مما يوقف تقدم سرطان الكبد، مما يشير إلى قيمته المحتملة كمادة طبيعية مضادة للسرطان.
关键词
الكيرسيتين;سرطان الكبد;تحلل الجلوكوز;الاستجابة لنقص الأكسجة;عضو عائلة ناقل المذاب 2 (SLC2A1);كيناز البيروفات M (PKM);كيناز الجلسيرول الفسفات 1 (PGK1)