الهدف هو دراسة الآلية الجزيئية التي من خلالها يقوم SalB (حمض السالفيينك B) بخفض تعبير أنزيم PAICS (يناز يربط الفوسفات والريبوز والأمينيميدازول) ليثبط التحول الظهاري اللحائي (EMT) في سرطان الرئة غير صغير الخلايا (NSCLC). الطريقة تعتمد على خلايا A549 لسرطان الرئة غير صغير الخلايا وخلايا BEAS-2B الظهارية القصبية الطبيعية كنموذج، باستخدام اختبار CCK-8 لتقييم تأثير SalB (0، 50، 100، 200، 300، 400، 500 ميكرومول/لتر) بعد 24 ساعة أو 48 ساعة على حيوية الخلايا، لاختيار التركيز الفعال والآمن؛ الكشف عن تأثير SalB على تكاثر دورة الحيوية وموت الخلايا في خلايا A549 باستخدام تلوين EdU والتحليل بالتدفق؛ تقييم تأثيره على تحرك وخطورة الخلايا باستخدام تجارب تمزيق وخز عبر الغشاء (Transwell) ؛ تحليل التعبير الجيني والتخصيب الوظيفي مبنيا على تسلسل RNA والبيوانفورماتيك ؛ توقع ترابط SalB مع PAICS بواسطة التحليل الجزيئي؛ تقييم تأثير SalB على ثبات الحرارة لبروتين PAICS باستخدام تجربة CETSA. قام Western blot بتحليل تعبير PAICS والبروتينات المرتبطة بالتحول الظهاري اللحائي مثل E-cadherin، N-cadherin، Vimentin، Snail و Slug بدلالة SalB؛ تمت إعادة التعبير باستخدام بلازميد PAICS لإجراء تجارب إنقاذ الوظيفة. النتائج أظهرت تثبيط تركيزي معتمد من SalB لحيوية خلايا A549 (P<0.05) دون تأثير كبير على خلايا BEAS-2B ضمن التركيزات الفعالة (≤300 ميكرومول/لتر)؛ ضمن هذا النطاق، قيد SalB تكاثر، تحرك، وخطورة خلايا A549، وسبب توقف في المرحلة G0/G1 وموت الخلايا (P<0.05). أظهر تحليل النسخ خفضاً كبيراً في تعبير PAICS وتركيز الوظائف على التكاثر والتحول الظهاري اللحائي؛ أظهرت البيانات البيوانفورماتية ارتفاع تعبير PAICS في سرطان الغدة الرئوي وارتباطه بالسوء في التوقع (P<0.01). أظهر التحليل الجزيئي ترابطاً قوياً بين SalB وPAICS (طاقة الارتباط -9.1 كيلوكالوري/مول)؛ CETSA بين أن SalB يعزز ثبات بروتين PAICS حرارياً (P<0.05). أظهر Western blot تثبيط SalB لتركيز PAICS، وزيادة تعبير E-cadherin، وانخفاض N-cadherin، Vimentin، Snail، و Slug (P<0.05). أظهرت تجارب إنقاذ الوظيفة أن تعبير PAICS المفرط عزز بشكل ملحوظ تكاثر، تحرك، وخطورة خلايا A549، وساهم في تقدم دورة الخلية وكبت الموت (P<0.05)؛ مع وجود PAICS المفرط، كان هناك عكس جزئي لتأثير SalB على الخصائص الخبيثة والبروتينات ذات العلاقة بالتحول الظهاري اللحائي (N-cadherin، Vimentin، Snail، Slug) وانخفاض في تعبير E-cadherin (P<0.05، P<0.01)، مما يشير إلى أن PAICS هو الهدف الوظيفي الأساسي لتأثير SalB المضاد للأورام. الخلاصة أن SalB يثبط تقدم EMT ودورة الخلية في خلايا A549 بخفض تعبير PAICS، مما يؤثر إيجاباً على مكافحة NSCLC. تكشف الدراسة دور PAICS كهدف رئيسي لتنظيم EMT بواسطة SalB وتوفر الدليل التجريبي لاستخدام SalB كمرشح محتمل لعلاج وانتشار NSCLC.

سرطان الرئة غير صغير الخلايا;حمض السالفيينك B;انزيم PAICS;التحول الظهاري اللحائي;الهجرة والخطورة