Einfluss des medikamentösen Blutserums der Huangqin Qīngrè Chúbì-Kapsel auf die Expression von CircRNA_0001543/NF-κB in peripheren Blutmononukleären Zellen und synovialen Fibroblasten von AS-Patienten

QI Yajun ,  

LIU Jian ,  

ZHOU Qiao ,  

HU Yuedi ,  

DING Xiang ,  

CONG Chengzhi ,  

LI Xu ,  

摘要

Ziel dieser Studie war es, den Einfluss des medikamentösen Blutserums der Huangqin Qīngrè Chúbì-Kapsel auf die Expression von CircRNA_0001543/Nuklearen Transkriptionsfaktoren (NF)-κB in peripheren Blutmononukleären Zellen (PBMCs) und menschlichen synovialen Fibroblasten (FLSs) von Patienten mit Spondylitis ankylosans (AS) zu untersuchen. Methoden: Venenblut wurde von AS-Patienten abgenommen, PBMCs wurden isoliert und extrahiert; FLSs wurden mit PBMCs von AS-Patienten kultiviert, und nach der Kultivierung wurden die FLSs für nachfolgende Experimente gesammelt. Die Kontrollgruppe bestand aus normalen FLSs, die Modellgruppe aus Zellkultivierung mit PBMCs von AS, die den pathologischen Zustand von AS simulierten, die Huangqin Qīngrè Chúbì-Gruppe aus der Zugabe von mediziniertem Blutserum der Huangqin Qīngrè Chúbì-Kapsel (6,48 g·kg-1) zur Kultivierung. Es wurde der Effekt des HQC-behandelten Serums auf die Vitalität der Zellkultivierung untersucht, indem das Experiment in leere Gruppen, 10% HQC-Gruppen, 20% HQC-Gruppen und 30% HQC-Gruppen aufgeteilt wurde. Es wurde der Effekt der optimalen Konzentration des HQC-behandelten Serums auf die Expression von Zytokinen und Pfadmarkern in den entsprechenden Gruppen untersucht, indem das Experiment in die Kontrollgruppe, die Modellgruppe und die Gruppe mit der optimalen Konzentration des HQC-behandelten Serums aufgeteilt wurde. Die Effektvalidierung der Transfektion des Interferenzplasmids von CircRNA_0001543 wurde durch Aufteilung des Experiments in leere Gruppen, si-NC-Gruppen (plus Transfektionsagent), si-circ_0001543-1-Gruppen (plus Transfektionsagent und Interferenzplasmid Transfektion von circ_0001543-1), si-circ_0001543-2-Gruppen (plus Transfektionsagent und Interferenzplasmid Transfektion von circ_0001543-2), si-circ_0001543-3-Gruppen (plus Transfektionsagent und Interferenzplasmid Transfektion von circ_0001543-3) durchgeführt. Die Effektvalidierung der Überexpression des Plasmids von CircRNA_0001543 wurde durch Aufteilung des Experiments in die leere Gruppe, die OE-NC-Gruppe (plus Transfektionsagent), die OE-circ_0001543-Gruppe (plus Transfektionsagent und Überexpression des Plasmids von circ_0001543) durchgeführt. Der Effekt der Interferenz/Überexpression von CircRNA_0001543 auf die Expression von Zytokinen und Pfadmarkern in den entsprechenden Gruppen wurde durch Aufteilung des Experiments in die si-NC-Gruppe, die si-CircRNA_0001543-Gruppe, die OE-NC-Gruppe und die OE-CircRNA_0001543-Gruppe untersucht. Der Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) wurde zur Bestimmung der Spiegel von Interleukin (IL)-1β, IL-10, IL-37 und der Expression des Tumornekrosefaktors-α (TNF-α) eingesetzt; die Echtzeit-quantitative Polymerase-Kettenreaktion (Real-time PCR) wurde zur Bestimmung der Expression von CircRNA_0001543, IκBα, NF-κB p65 verwandten Genen eingesetzt. Ergebnisse: Nach 48 Stunden zeigte das 30%ig HQC-behandelte Blutserum der Huangqin Qīngrè Chúbì-Kapsel eine signifikante Hemmung der Proliferation der Zellkultivierung von PBMCs von AS und FLSs, was die optimale Behandlungsdosierung darstellt. Im Vergleich zur Kontrollgruppe zeigte die Modellgruppe eine signifikante Zunahme der Expression von NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α (P<0,01), und eine signifikante Abnahme der Expression von CircRNA_0001543 mRNA, IL-10, IL-37 (P<0,01). Im Vergleich zur Modellgruppe zeigten die verschiedenen Gruppen des HQC-behandelten Blutserums der Huangqin Qīngrè Chúbì-Kapsel eine signifikante Abnahme der Expression von NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α (P<0,05), und eine signifikante Zunahme der Expression von CircRNA_0001543 mRNA, IL-10, IL-37 (P<0,05); wobei die 30% ige Behandlungsgruppe die deutlichste Unterschiede aufwies (P<0,01). Im Vergleich zur si-NC-Gruppe zeigte die si-CircRNA_0001543-Gruppe eine signifikante Abnahme der Expression von CircRNA_0001543 (P<0,01); im Vergleich zur OE-NC-Gruppe zeigte die OE-CircRNA_0001543-Gruppe eine signifikante Zunahme der Expression von CircRNA_0001543 (P<0,01), was darauf hinweist, dass die Transfektion der Plasmide si-CircRNA_0001543, OE-CircRNA_0001543 erfolgreich war. Nach der Intervention mit der optimalen Behandlungsdosierung des HQC-behandelten Blutserums der Huangqin Qīngrè Chúbì-Kapsel zeigte die si-CircRNA_0001543-Gruppe eine signifikante Zunahme der Expression von NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α (P<0,01), und eine signifikante Abnahme der Expression von IL-10, IL-37 (P<0,01); die OE-CircRNA_0001543-Gruppe zeigte eine signifikante Abnahme der Expression von NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α (P<0,01), und eine signifikante Zunahme der Expression von IL-10, IL-37 (P<0,01). Fazit: Das medikamentöse Blutserum der Huangqin Qīngrè Chúbì-Kapsel erhöht die Expression von CircRNA_0001543, reguliert den NF-κB-Pfad, hemmt entzündliche Faktoren, erhöht die Expression entzündungshemmender Faktoren und verbessert die immunentzündliche Reaktion von AS.

关键词

Huangqin Qīngrè Chúbì; Spondylitis ankylosans; periphere Blutmononukleäre Zellen; synoviale Fibroblasten von Menschen; CircRNA_0001543/Nuklearen Transkriptionsfaktoren-κB

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