Molekularer Mechanismus der Hemmung der A549-Proliferation durch Astragalus-Weißer-Waldmeister über die Regulation der LINC01134-CTCF-p21-Achse

SUN Haipeng ,  

ZHUANG He ,  

LIU Xue ,  

LIU Siyuan ,  

摘要

Ziel ist es, die Wirkung der nicht-codierenden RNA LINC01134, die mit dem CCCTC-Bindeprotein (CTCF) konkurriert, auf den cyclinabhängigen Kinaseninhibitor (p21) und dessen Einfluss auf die Proliferation der A549-Zellen zu untersuchen, um den möglichen Regulationsmechanismus der Astragalus-Weißer-Waldmeister-Kombination auf dieser Achse bei der Hemmung der A549-Proliferation zu erforschen. Methoden: RNA-bindende Protein-Immunpräzipitation (RIP) zur Untersuchung der Interaktion zwischen LINC01134 und CTCF; Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) zur Untersuchung der Auswirkung der Überexpression von LINC01134 auf die Interaktion von CTCF mit p21; lentivirale Transfektion zur Erzeugung stabiler A549-Zelllinien oe-NC, oe-LINC01134, mit Zugabe von 10 % Serum mit Astragalus-Weißer-Waldmeister in jede Gruppe. Real-time PCR und Western Blot zur Untersuchung der Auswirkungen auf LINC01134, CTCF und p21 in A549-Zellen; Zellproliferation und Aktivitätstests (CCK-8), Kolonie-Bildungstests zur Bewertung der Wirkung via LINC01134 auf die A549-Proliferation; Durchflusszytometrie zur Untersuchung des Einflusses auf den Zellzyklus; Western Blot zur Untersuchung der Auswirkungen auf Zellzyklusproteine. Ergebnisse: Im Vergleich zu Immunglobulin G (IgG) erhöhte sich in der oe-CTCF-Gruppe die Anhäufung von LINC01134 signifikant (P<0,01); im Vergleich zur oe-Vector-Gruppe reduzierte sich in der oe-LINC01134-Gruppe die Bindung von p21 an CTCF signifikant (P<0,01); im Vergleich zur 10 % Leer+oe-LINC01134-Gruppe kehrte die 10 % Astragalus-Weißer-Waldmeister+oe-LINC01134-Gruppe die Expression von LINC01134 und p21 um (P<0,05), jedoch ohne signifikanten Einfluss auf CTCF; dieselbe Gruppe kehrte die Zellvitalität nach 72 Stunden um (P<0,05), die maligne Proliferation (P<0,05), die Zellanteile in G0/G1- und S-Phase (P<0,01); sowie die Expression von Cyclin D1, CDK4, Cyclin E, CDK2, p-Rb, E2F3 (P<0,01). Schlussfolgerung: Das Präparat Astragalus-Weißer-Waldmeister reguliert die LINC01134-CTCF-p21-Achse zur Hemmung der G1/S-Phasen-Transition des Zellzyklus in A549-Zellen, beschleunigt die Zellseneszenz und hemmt deren maligne Proliferation.

关键词

Astragalus-Weißer-Waldmeister; LINC01134-CTCF-p21-Signalachse; Zyklus; Seneszenz; Proliferation

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