Ziel der Studie ist es, zu untersuchen, ob die modifizierte Pfirsichkerngleichung (JTCT) Leberfibrose durch Hemmung der Kapillarisierung der Leber-Sinusoide behandelt und der spezifische Mechanismus mit dem Notch-Signalweg des Drosophila-Flügelschlags homologen Gens (Notch) und dem endothelbasierten Stickstoffmonoxidsynthase-Signalweg (eNOS) zusammenhängt. Methode: 50 C57BL/6-Mäuse wurden zufällig in eine normale Gruppe, eine Modellgruppe (5 ml·kg^-1·3 d^-1) sowie in niedrige, mittlere und hohe Dosisgruppen von JTCT (JTCT-L, JTCT-M, JTCT-H) (16,6, 33,3, 66,6 g·kg^-1·d^-1) eingeteilt. Mit Ausnahme der normalen Gruppe erhielten die anderen Mäuse alle 3 Tage intraperitoneal eine 20%-ige Tetrachlorkohlenstoff(CCl4)-Olivenöllösung zur Induktion des Leberfibrosemodells über 4 Wochen. Gleichzeitig erhielten die JTCT-L, JTCT-M, JTCT-H Gruppen täglich die jeweilige Dosis per Magengavage für 4 Wochen (die normale und Modellgruppe erhielten ein isovolumetrisches physiologisches Kochsalzlösungsgavage). Primäre Leber-Sinusoide-Endothelzellen (LSECs) wurden aus Rattenlebern durch extrazelluläre Kollagenase-Perfusion, Percoll-Dichteschicht-Zentrifugation und selektive Kupffer-Zell-Entfernung isoliert, phänotypisch bestätigt und für Versuche verwendet. Nach Kultivierung bis zur logarithmischen Wachstumsphase wurde ein Small-Interfering-RNA (siRNA)-Kit zur transienten Transfektion verwendet, um die Expression der löslichen Guanylatcyclase (sGC) herunterzuregulieren. Anschließend erfolgte eine transient siRNA-Transfektion zur Herunterregulierung von sGC, kombiniert mit dem Notch-Aktivator Jagged-1. Die Zellproliferationshemmung von LSECs durch JTCT wurde mit dem CCK-8-Kit gemessen, die Gen- und Proteinexpression der Notch- und eNOS-Signalwege mittels Echtzeit-PCR und Western Blot, und intrazelluläre Ca^2+-Ionen mit der fluoreszenten Sonde Fluo-4/AM markiert. Ergebnisse: Im Vergleich zur Normalgruppe zeigten die Mäuse der Modellgruppe Leberfettverfettung, Infiltration entzündlicher Zellen, Hepatozytendegeneration und Nekrose, lobuläre Desorganisation sowie Fibroblastenproliferation; serumspiegel von Hydroxyprolin (Hyp), Alaninaminotransferase (ALT) und Aspartataminotransferase (AST) waren signifikant erhöht (P<0,01); Expression von Notch1, Hes1, CD31, von Willebrand Faktor (vWF) war deutlich erhöht (P<0,01), während phospho(p)-eNOS/eNOS und sGC signifikant vermindert waren (P<0,01). Im Vergleich zur Modellgruppe zeigten alle JTCT-Dosierungen eine signifikante Reduktion von Hyp, ALT, AST im Serum (P<0,01); verringerte hepatische Expression von Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0,05, P<0,01); und eine deutliche Erhöhung von p-eNOS/eNOS und sGC (P<0,05, P<0,01), wobei die stärkste Verbesserung bei der JTCT-H Gruppe zu verzeichnen war (P<0,01). In vitro zeigten LSEC-5day im Vergleich zu LSEC-1day erhöhte Expression von Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0,01) und reduzierte Expression von p-eNOS/eNOS und sGC (P<0,01); die intrazelluläre Ca^2+-Konzentration war signifikant erhöht (P<0,01). Verglichen mit LSEC-5day zeigte die JTCT-Gruppe signifikant reduzierte Expression von Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0,01) und erhöhte Expression von p-eNOS/eNOS (P<0,01); die intrazelluläre Ca^2+-Konzentration war signifikant reduziert (P<0,01). Zwischen der Jagged1- und der Jagged1+JTCT-Gruppe bestanden keine signifikanten Unterschiede im Expressionsniveau und Ca^2+-Konzentration. Im Vergleich zu LSEC-5day zeigte die sGC-Knockout-Gruppe (sGC-KO) erhöhte Expression von CD31, vWF (P<0,01). Es bestanden keine signifikanten Unterschiede zwischen sGC-KO und sGC-KO+JTCT. Fazit: JTCT behandelt Leberfibrose durch Hemmung der Aktivierung des Notch-Signalwegs und Wiederherstellung der eNOS-Signalwegaktivität, wodurch die Kapillarisierung von LSECs inhibiert wird.

Modifizierte Pfirsichkerngleichung; Kapillarisierung der Leber-Sinusoide; Notch-Homolog-Signalweg; endotheliale Stickstoffmonoxid-Synthase (eNOS)-Signalweg; Leberfibrose