Ziel ist der Aufbau eines wettbewerbsfähigen endogenen RNA (ceRNA)-Regulationsnetzwerks in Verbindung mit microRNA-342-3p (miR-342-3p) und die Erforschung des molekularen Mechanismus, durch den Danlou Tabletten (DLT) die Lipidablagerung in der Leber durch das zirkuläre RNA reiche an transmembranösem Cystein BMP-Regulator 1 (circCRIM1) / miR-342-3p / SRY-Box-Transkriptionsfaktor 6 (SOX6) mediiert die Fettsäuresynthese verbessern. Datenbanken wurden verwendet, um das miR-342-3p bezogene ceRNA-Regulationsnetzwerk zu konstruieren, und ein Doppel-Luciferase-Berichtstests wurde durchgeführt, um die Zielbeziehungen zwischen circCRIM1/miR-342-3p und miR-342-3p/SOX6 zu bestätigen. In vivo-Experimente verwendeten C57BL/6-Mäuse als Kontrollgruppe, die mit normalem Futter ernährt wurden, während Apolipoprotein E Knockout (ApoE^-/-) Mäuse zufällig in Modellgruppe, DLT-Niedrig-, Mittel- und Hochdosisgruppen (DLT-L, DLT-M, DLT-H Gruppe, 340, 680, 1360 mg·kg^-1·d^-1) und Simvastatingruppe (2,275 mg·kg^-1·d^-1) eingeteilt wurden. Das Modell wurde durch 12-wöchige Fütterung mit fettreichem Futter aufgebaut, und anschließend wurden die Tiere 4 Wochen mit gleichzeitigem oralen Applikation behandelt. Ein vollautomatischer biochemischer Analysator wurde zur Messung der Serumlipid- und Leberfunktionswerte der Mäuse verwendet, und Kits wurden zur Bestimmung des Lipidniveaus in der Leber eingesetzt. Die histopathologischen Veränderungen des Lebergewebes wurden mittels Hämatoxylin-Eosin (HE) und Oil Red O-Färbung untersucht. Die Expression von circCRIM1 und miR-342-3p in der Leber wurde mittels quantitativer Echtzeit-PCR gemessen, ebenso die Expression von SOX6, PPARγ, LXRα, SREBP1c mRNA und Protein mittels Echtzeit-PCR und automatisiertem Western-Blot-System Wes. Die Immunhistochemie wurde zur Detektion der SOX6-Expression im Lebergewebe eingesetzt. In in vitro Experimenten wurde ein Lipidablagerungsmodell in HepG2-Zellen durch Ölsäure (OA) Induktion etabliert, wobei die Zellen in Kontrollgruppe (CON), OA-Gruppe (400 μmol·L^-1 OA), Blankserumgruppe (BS) (400 μmol·L^-1 OA + 10% Blankserum) und DLT-Gruppe (400 μmol·L^-1 OA + 10% DLT-mediziertes Serum) unterteilt wurden. Biochemische Kits wurden zur Messung des Lipidpegels der HepG2-Zellen verwendet, und Oil Red O-Färbung wurde zur Beobachtung morphologischer Veränderungen durchgeführt. Überexpression von circCRIM1 (OE-cricCRIM1), Hemmung von miR-342-3p (miR-342-3p Inhibitor) und Intervention mit DLT-mediziertem Serum wurden durchgeführt, und die Expression von circCRIM1, miR-342-3p und entsprechenden mRNAs wurde mittels Echtzeit-PCR gemessen. In vivo zeigten die Modellgruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe signifikante Anomalien der Serumlipide, Leberfunktion und Leberlipidspiegel (P<0,01), strukturelle Veränderungen im Lebergewebe, vermehrte Vakuolisierung und Lipidtropfenakkumulation, signifikante Erhöhung von circCRIM1, signifikante Verringerung von miR-342-3p, sowie signifikante Erhöhung der Expression von SOX6, PPARγ, LXRα, SREBP1c mRNA und Protein (P<0,01). Im Vergleich zur Modellgruppe zeigten die DLT-Gruppen unterschiedlicher Dosierung signifikante Verbesserungen der Serumlipide, Leberfunktion und Leberlipidspiegel (P<0,05, P<0,01), verringerte Leberschäden und Lipidtropfenansammlungen, verringerte circCRIM1-Expression, signifikant erhöhte miR-342-3p-Expression sowie signifikant verringerte Expression von SOX6, PPARγ, LXRα, SREBP1c mRNA und Protein (P<0,05, P<0,01). In vitro zeigten HepG2-Zellen in der OA-Gruppe im Vergleich zu CON einen signifikant erhöhten Lipidspiegel (P<0,01), vermehrte und vergrößerte Lipidtropfen, die sich nach Gabe von DLT-mediziertem Serum verbesserten; Überexpression von cricCRIM1 führte zu signifikanter Erhöhung von circCRIM1 und SOX6 mRNA, deutlicher Verringerung von miR-342-3p (P<0,05, P<0,01); Hemmung von miR-342-3p bewirkte signifikante Erhöhung von SOX6 mRNA und signifikante Verringerung von miR-342-3p (P<0,01); Gabe von DLT-mediziertem Serum führte zu signifikanter Erhöhung von miR-342-3p und signifikanter Verringerung von SOX6, PPARγ, LXRα, SREBP1c mRNA (P<0,01). Fazit: DLT kann die Lipidablagerung in der Leber durch Regulation der Fettsäuresynthese über den circCRIM1/miR-342-3p/SOX6 Signalweg verbessern und somit die Prävention und Behandlung von Atherosklerose fördern.

Danlou Tabletten; Atherosklerose; zirkuläre RNA reicher an transmembranem Cystein BMP-Regulator 1 (circCRIM1) / microRNA-342-3p (miR-342-3p) / SRY-Box-Transkriptionsfaktor 6 (SOX6); Fettsäuresynthese; Leberlipidablagerung