Mechanismus der Regulation des MEK/Ras/Raf/ERK-Signalwegs durch die Mimenghua-Formel bei der Entzündungsreaktion in einem Tiermodell des trockenen Auges

TAN Shi ,  

LIU Pei ,  

ZHONG Yuan ,  

TIAN Sainan ,  

JIANG Pengfei ,  

QIN Genyan ,  

PENG Qinghua ,  

PENG Jun ,  

摘要

Ziel ist es, die Rolle und den Mechanismus der Mimenghua-Formel bei der Regulation des Signalwegs der mitogenaktivierten Proteinkinase-Kinase (MEK)/Rat-Sarkom-Virus-Onkogen (Ras)/schnell beschleunigenden Fibrosarkom-Kinase (Raf)/extrazellulärer Signalkinase (ERK) zur Hemmung der Entzündungsreaktion in einem Tiermodell des trockenen Auges zu untersuchen. Es wurden 60 C57BL/6J-Mäuse im Alter von 8 Wochen ausgewählt, je zur Hälfte weiblich und männlich, davon wurden zufällig 10 als Leergruppe ausgewählt, die restlichen 50 wurden einem kontrollierten Trocknungssystem ausgesetzt und erhielten über 4 Wochen zweimal täglich 0,2% Benzalkoniumchlorid-Augentropfen, um ein Modell des trockenen Auges zu etablieren. Nach erfolgreicher Modellerstellung wurden die Mäuse zufällig in eine Modellgruppe, eine Natriumhyaluronat-Gruppe, eine Gruppe mit niedriger Mimenghua-Dosis (4,83 g/kg), eine Gruppe mit mittlerer Mimenghua-Dosis (9,67 g/kg) und eine Gruppe mit hoher Mimenghua-Dosis (19,34 g/kg) eingeteilt. Die Modellgruppe erhielt vier Wochen lang die gleiche Menge physiologische Kochsalzlösung per Magenfütterung, die Natriumhyaluronat-Gruppe erhielt zweimal täglich über 14 Tage Augentropfen. Alle zwei Wochen wurden bei den verschiedenen Gruppen die Tränenproduktion, die Tränenfilmaufbruchszeit und die Fluoreszenzfärbung der Hornhaut gemessen. Nach vier Wochen Behandlung wurden die Mäuse getötet, die Tränendrüsen- und Hornhautgewebe wurden entnommen, mittels Hämatoxylin-Eosin (HE)-Färbung die histopathologische Morphologie untersucht, die Proteinexpression von MEK, Ras, Raf, ERK durch Western Blot analysiert, mittels ELISA die Gewebeexpression von MEK, Ras, Raf, ERK und Interleukin-1β (IL-1β) bestimmt und die mRNA-Expression der MEK-, Ras-, Raf- und ERK-Gene durch Real-Time PCR in den Tränendrüsen und Hornhautgeweben gemessen. Die Ergebnisse zeigten nach der Behandlung in der Mimenghua- und Hyaluronsäuregruppe eine signifikante Zunahme der Tränenproduktion (P<0,05) sowie eine signifikante Verlängerung der Tränenfilmaufbruchszeit (P<0,05). Es wurde eine Wiederherstellung der Augenschädigungen beobachtet. Western Blot zeigte eine signifikante Abnahme der MEK-, Ras-, Raf- und ERK-Proteinexpression in Tränendrüsen- und Hornhautgeweben in den Gruppen mit Hyaluronsäure und hoher Mimenghua-Dosis (P<0,05). ELISA-Ergebnisse zeigten den höchsten IL-1β-Spiegel in der Modellgruppe, mit signifikanter Absenkung in der Hyaluronsäure- und Mimenghua-Gruppe (P<0,05). ELISA und Real-Time PCR zeigten eine signifikante Erhöhung der MEK-, Ras-, Raf- und ERK-Level in Hornhaut- und Tränendrüsengeweben der Modellgruppe (P<0,05) und eine signifikante Herunterregulierung der Expression in der Hyaluronsäure- und Mimenghua-Gruppe (P<0,05), was darauf hinweist, dass Mimenghua die Expression von MEK, Ras, Raf und ERK in Tränendrüsen- und Hornhautgeweben reduzieren kann. Fazit: Die Mimenghua-Formel kann durch Hemmung des MEK-/Ras-/Raf-/ERK-Signalwegs in Hornhaut- und Tränendrüsengeweben die Entzündungsreaktion lindern, die Tränenproduktion erhöhen, die Tränenfilmaufbruchszeit verlängern und die Hornhautreparatur fördern.

关键词

trockenes Auge;Mimenghua-Formel;Entzündungsreaktion;Hornhaut;Tränendrüse

阅读全文