Charakterisierung eines gleichmäßigen Polysaccharids von Qi Gui und Bewertung seiner Wirkung bei der Colitis ulcerosa

LIU Wenjuan ,  

MA Shanbo ,  

BU Ying ,  

MA Tao ,  

SHI Xiaopeng ,  

TANG Yuping ,  

摘要

Der Zweck besteht darin, die Immunmodulation der Polysaccharide Qi Gui auf LPS-induzierte RAW264.7-Makrophagenzellen zu untersuchen und den aktiven Bestandteil Qi Gui AAPS-4a zu charakterisieren und seine Schutzwirkung bei der Colitis ulcerosa (UC) zu bewerten. Die Zellproliferations- und Aktivitätstestmethode (CCK-8) wurde zur Untersuchung des Effekts von 6 Arten von Qi Gui-Polysacchariden (0,01~100 mg·L-1) auf die Proliferation von RAW264.7-Zellen verwendet. Das Enzymimmunoassay (ELISA) wurde verwendet, um den Effekt von 6 Arten von Qi Gui-Polysacchariden (3, 10 mg·L-1) auf die durch LPS induzierten TNF-α, IFN-β und NO-Werte in RAW264.7-Zellen zu untersuchen. Nach der Auswahl aktiver Polysaccharide wurde die Hochleistungs-Gelchromatographie (HPSEC) verwendet, um ihre Gleichmäßigkeit und relative Molekülmasse zu messen, die Fourier-Transformations-Infrarotspektroskopie (FT-IR) zur Identifizierung charakteristischer funktioneller Gruppen, die Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) zur Analyse der Monosaccharidzusammensetzung, die Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS) zur Analyse des Typs und der Verknüpfungsweise von Zuckerrückständen und die ein- und zweidimensionale Kernspinresonanzmethoden (NMR) zur Bestimmung der Zuckerrückstands- und Konfigurationszusammensetzung verwendet. Im Tierversuch wurde in eine normale Gruppe, eine Modellgruppe, eine niedrigdosierte AAPS-4a-Gruppe (50 mg·kg-1), eine hochdosierte AAPS-4a-Gruppe (100 mg·kg-1>) und eine Sulphasalazine (SASP)-Gruppe (75 mg·kg-1) unterteilt, außer der normalen Gruppe wurden 3,5% Natriumdextransulfat (DSS) verwendete, um ein akutes UC-Modell bei Mäusen zu induzieren. Jede Behandlungsgruppe erhielt 7 Tage lang eine entsprechende Dosis durch Magensonde, und Veränderungen im Körpergewicht der Mäuse wurden aufgezeichnet. Nach Abschluss der Behandlung wurden der Milzindex und die Krankheitsaktivitätsindex (DAI) berechnet, ELISA zur Bestimmung der TNF-α und Interleukin-6 (IL-6) Werte im Serum durchgeführt, und die pathologischen Veränderungen im Darmgewebe wurden mit Hämatoxylin-Eosin (HE)-Färbung beobachtet. Auf Zellebene kann AAPS-4a dosisabhängig die erhöhten TNF-α, IFN-β und NO-Werte durch LPS in RAW264.7-Zellen hemmen. Die Charakterisierung von AAPS-4a zeigt, dass es sich um ein gleichmäßiges Polysaccharid mit einem relativen Molekulargewicht von 7,6×103 Da handelt, das Mannose (Man), Glucose (Glc) und Galactose (Gal) enthält, mit einem molaren Verhältnis von 1,3∶23,9∶1,0, das hauptsächlich aus 1,6-α-D-Glcp, T-α-D-Glcp, 1,3-β-D-Galp, 1,4-α-D-Manp und 1,2-α-D-Galp fünf Arten von Zuckerrückständen besteht. Die In-vivo-Experimente zeigen, dass im Vergleich zur normalen Gruppe die DAI-Werte von Mäusen der Modellgruppe und der Milzindex signifikant erhöht waren, die Länge des Kolons signifikant verkürzt war und die Werte der Entzündungsfaktoren TNF-α und IL-6 signifikant erhöht waren (P<0,01); im Vergleich zur Modellgruppe kann die hochdosierte AAPS-4a-Gruppe die DAI-Werte, den Milzindex und die Werte von TNF-α und IL-6 reduzieren und die Darmatrophie verbessern (P<0,05, P<0,01). Die pathologische Beobachtung zeigt, dass AAPS-4a die Entzündungszellinfiltration im Kolongewebe signifikant hemmen und den pathologischen Schaden lindern kann. Zusammenfassend ist AAPS-4a ein neutrales gleichmäßiges Polysaccharid, das aus 1,6-α-D-Glcp, T-α-D-Glcp, 1,3-β-D-Galp, 1,4-α-D-Manp und 1,2-α-D-Galp besteht, das der Schlüsselwirkstoff von Qi Gui-Medikament ist, um seine anti-UC-Wirkung auszuüben und ein potentielles klinisches Anwendungswert hat.

关键词

Qi Gui-Dang Gui Medikamente; Polysaccharide; Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC); Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS); Kernspinresonanz (NMR); Immunmodulation; Colitis ulcerosa (UC)

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