Ziel der Studie ist es, die Rolle und den Mechanismus von Taishan Panshi Pulver (TSPSP) bei der Hemmung von oxidativem Stressschaden in humanen Trophoblastenzellen (HTR-8/SVneo) zu untersuchen und den Wirkungsmechanismus von TSPSP bei der Behandlung von spontanen Fehlgeburten (SA) zu verstehen. Mittels klinischer Datenbank (GEO) wurde eine genetische Differenzanalyse bei SA durchgeführt und mit oxidativem Stress in Verbindung gebracht. Mithilfe der Netzwerkpharmakologie wurden die aktiven Bestandteile von TSPSP ausgewählt, ein „TCM-Komponente-Ziel-Krankheit“-Netzwerk erstellt und der Wirkmechanismus von TSPSP vorhergesagt. In vitro wurden HTR-8/SVneo Zellen in Kontroll-, Modell-, TSPSP Medikamentenserumgruppen (2,5%, 5%, 10%) und eine Nrf2-Inhibitorgruppe (ML385, 30 μmol/L) eingeteilt. Mit Ausnahme der Kontrollgruppe wurden die anderen Gruppen mit 150 μmol/L H2O2 für 3 Stunden stimuliert, um ein Zellmodell für oxidativen Stress zu erzeugen. Nach erfolgreicher Modellierung erhielten Kontroll- und Modellgruppen 10% leeres Serum, TSPSP-Gruppen das entsprechende Medikamentenserum, und die Nrf2-Inhibitorgruppe zusätzlich 30 μmol/L ML385 zusammen mit 10% TSPSP-Serum. Die Zellen wurden 24 Stunden kultiviert, Proben gesammelt und weiter untersucht. Zellproliferationsaktivität (CCK-8), Zellmigration (Wundheilungstest), MDA, Fe2+, GSH (ELISA), intrazelluläre ROS (DCF-DA), Protein- und mRNA-Expression von KEAP1, Nrf2, FoxO3 (Immunfluoreszenz, RT-PCR) sowie Proteinausdruck von KEAP1, Nrf2, FoxO3, GPX4, SOD (Western blot) wurden bestimmt. Die GEO-Datenanalyse ergab, dass KEAP1, Nrf2 und FoxO3 Gene mit der Erkrankung assoziiert sind; nach Abgleich mit oxidativen Stresswegen wurden 9 signifikante Pfade (P<0,05) identifiziert, darunter 3 mit den Zielgenen Nrf2, FoxO3. Netzwerkpharmakologie identifizierte 246 TSPSP-Zielproteine und 2804 SA-Ziele, 154 potentielle Schnittstellentargets. Topologische Analyse zeigte hohe Knotenwerte für KEAP1 und Nrf2. GO- und KEGG-Anreicherungsanalysen wiesen auf Beteiligung an oxidativer Stressantwort, FoxO- und MAPK-Signalwegen hin. In vitro zeigte die Modellgruppe eine signifikante Abnahme der Zellvitalität (P<0,01); die TSPSP-Gruppen zeigten signifikante Zunahme (P<0,01); ML385 reduzierte die Vitalität auf ca. 70% (P<0,01). MDA, Fe2+, ROS waren in der Modellgruppe erhöht, GSH und Migration verringert (P<0,01). KEAP1 und FoxO3 Protein- und mRNA-Expressionsniveaus waren erhöht, Nrf2, GPX4 und SOD verringert (P<0,01). TSPSP kehrte diese Veränderungen um (P<0,01), ML385 kehrte die TSPSP-Wirkung um (P<0,05). Fazit: TSPSP verhindert H2O2-induzierten oxidativen Stressschaden in Trophoblastenzellen vermutlich durch Aktivierung des KEAP1/Nrf2/FoxO3-Signalwegs.

Taishan Panshi Pulver; spontane Fehlgeburt; Kelch-ähnliches ECH-assoziiertes Protein 1/ nuklearer Faktor E2-ähnlicher Faktor/ FoxO3-Signalweg (KEAP1/Nrf2/FoxO3); humane Trophoblastenzellen; oxidativer Stressschaden