Ziel ist es, die Wirkung und den Mechanismus von Taishan Panshi Pulver (TSPSP) bei der Hemmung von oxidativem Stressschaden in humanen Chorionzellentrophoblasten (HTR-8/SVneo) zu untersuchen und den Wirkmechanismus von TSPSP bei der Behandlung von Spontanaborten (SA) zu verstehen. Methoden umfassen eine Analyse differentieller Gene bei SA aus der klinischen Datenbank (GEO) in Verbindung mit oxidativem Stress, Screening der aktiven TSPSP-Bestandteile mittels Netzpharmakologie, Aufbau eines „Kräuter-Bestandteil-Ziel-Krankheit“-Netzwerks und Vorhersage des Wirkmechanismus von TSPSP. In vitro wurden HTR-8/SVneo-Zellen in Kontroll-, Modell-, TSPSP-Serumgruppen (2,5%, 5%, 10%) sowie Nrf2-Inhibitor-Gruppe (ML385, 30 μmol·L⁻¹) eingeteilt. Außer der Kontrollgruppe wurden die anderen 3 Stunden lang mit 150 μmol·L⁻¹ H_2O_2 stimuliert, um ein Modell für oxidativen Zellstress zu erzeugen. Nach erfolgreicher Modellierung erhielten Kontroll- und Modellgruppen 10% Kontrollserum, TSPSP-Gruppen entsprechend dosiertes Serum, die Nrf2-Inhibitorgruppe erhielt 10% TSPSP-Serum plus 30 μmol·L⁻¹ ML385. Alle Gruppen wurden 24 Stunden unter diesen Bedingungen kultiviert und Proben gesammelt. Zellproliferationsaktivität (CCK-8), Zellmigration (Wundheilungstest), MDA-, Fe^2+-, GSH-Gehalte (ELISA), intrazelluläre ROS (DCF-DA-Fluoreszenzsonde), Protein- und mRNA-Expression von KEAP1, Nrf2, FoxO3 (Immunfluoreszenz, Echtzeit-PCR) sowie Proteinexpression von KEAP1, Nrf2, FoxO3, GPX4, SOD (Western Blot) wurden bestimmt. Ergebnisse aus der GEO-Datenbank zeigten die Relevanz der Gene KEAP1, Nrf2, FoxO3 bei der Erkrankung; es wurden 9 signifikante differenzielle oxidativen Stresswege (P<0,05) gefunden, davon 3 mit Nrf2, FoxO3. Netzpharmakologie identifizierte 246 TSPSP-Aktivkomponenten-Ziele und 2804 SA-bezogene Ziele, mit 154 Überschneidungen. Topologische Analyse ergab hohe Knotengrade für KEAP1, Nrf2; GO- und KEGG-Analysen zeigten Beteiligung an oxidativem Stress, FoxO- und MAPK-Signalwegen. In vitro nahm die Zellaktivität der Modellgruppe im Vergleich zur Kontrolle signifikant ab (P<0,01); bei TSPSP signifikant zu (P<0,01); ML385 reduzierte auf ca. 70% (P<0,01). Modellgruppe zeigte erhöhte MDA-, Fe^2+-, ROS-Werte, reduzierte GSH-Expression und Zellmigration (P<0,01); erhöhte KEAP1-, FoxO3-Protein- und mRNA-Levels, erniedrigte Nrf2-, GPX4-, SOD-Level (P<0,01). Im Vergleich reduzierte TSPSP MDA, Fe^2+, ROS, erhöhte GSH, Migration und kehrte Proteinexpressionen um (P<0,05; P<0,01); ML385 kehrte diese Effekte um (P<0,05; P<0,01). Fazit: TSPSP hemmt H_2O_2-induzierte oxidativen Stressschaden in Trophoblastzellen vermutlich durch Aktivierung des KEAP1/Nrf2/FoxO3 Signalwegs.

Taishan Panshi Pulver; Spontanabort; Kelch-ähnliches ECH-assoziiertes Protein 1/Nukleärer Faktor E2-ähnlicher Faktor 2/FoxO3-Protein (KEAP1/Nrf2/FoxO3); humaner Choriontrophoblast; oxidativer Stressschaden