Ziel ist es, die Wirkung der Formulierung zur Beseitigung von Blutergüssen und Entgiftung auf Hirn-Mikrogefäß-Endothelzellen (BMECs) nach Glukose- und Sauerstoffmangel (OGD) zu untersuchen sowie die Interventionsmechanismen. Methode: Die Zellproliferations- und Aktivitätsmessung (CCK-8) wurde verwendet, um die OGD-Zeit zu bestimmen, und die Wirkstoffkonzentration des mit der Formulierung behandelten Serenauswahl wurde bestimmt; Zellen wurden zufällig in folgende Gruppen eingeteilt: Kontrollgruppe mit blankem Serum (KBXQ), Modellgruppe (OGD), HYXQ-Gruppe (OGD + mit Formulierung behandeltes Serum), 3-Methyladenin (3-MA)-Gruppe (OGD + 3-MA). Zellmorphologie wurde unter dem invertierten Mikroskop beobachtet; die Anzahl der Autophagosomen und Autolysosomen wurde unter dem Elektronenmikroskop betrachtet; Zellüberlebensrate wurde mittels CCK-8 bestimmt; Apoptose wurde mit TUNEL-Methode gemessen; Proteinexpression von Mikrotubuli-assoziiertem Protein 1 Leichtkette 3 (LC3) und Occludin wurde mittels Immunfluoreszenz untersucht; die Permeabilität von Zellmonoschichten wurde bestimmt. Die Zellen wurden zufällig in KBXQ-, Modell-(OGD)-, HYXQ-, Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K)-Inhibitor (LY294002) (OGD + LY294002) und HYXQ+LY294002 (OGD + Formulierung + LY294002) Gruppen eingeteilt. Protein-Immunoblot (Western blot) wurde verwendet, um die Schlüsselmoleküle der Autophagie wie Atg6-Homolog 1 (Beclin1), LC3Ⅱ/LC3Ⅰ, selektives Autophagieadapterprotein (p62), Occludin, phosphoryliertes (p)-PI3K, PI3K, p-Protein-Kinase B (Akt), Akt, p-mTOR und mTOR Proteinlevels zu bestimmen. Ergebnisse: OGD 6 h wurde als optimale Modellierungsbedingung gewählt, 5% als beste Wirkungskonzentration des mit der Formulierung behandelten Serums. Im Vergleich zur KBXQ-Gruppe zeigten die Modellgruppe unter dem invertierten Mikroskop deutliche Zellschäden, eine signifikante Erhöhung der Autophagosomen und Autolysosomen unter dem Elektronenmikroskop, eine signifikante Abnahme der Zellüberlebensrate (P<0,01), einen signifikanten Anstieg der Apoptoserate (P<0,01), eine signifikante Erhöhung der LC3-Protein-Fluoreszenzintensität (P<0,01), eine signifikante Abnahme der Occludin-Fluoreszenzintensität (P<0,01) sowie eine signifikante Erhöhung der Monolayerpermeabilität (P<0,01); im Vergleich zur Modellgruppe verbesserten sowohl die HYXQ- als auch die 3-MA-Gruppe deutlich die Zellschäden, reduzierten die Anzahl der Autophagosomen und Autolysosomen deutlich, erhöhten die Überlebensrate signifikant (P<0,01), verringerten die Apoptose signifikant (P<0,01), verringerten die LC3-Fluoreszenzintensität signifikant (P<0,01), erhöhten die Occludin-Fluoreszenzintensität signifikant (P<0,01) und reduzierten die Monolayerpermeabilität (P<0,05). Western blot zeigte, dass im Vergleich zur KBXQ-Gruppe die Modellgruppe eine signifikante Erhöhung der Beclin1- und LC3Ⅱ/LC3Ⅰ-Expression (P<0,01) und eine signifikante Abnahme der p62-, Occludin-, p-PI3K/PI3K-, p-Akt/Akt- und p-mTOR/mTOR-Expressionsniveaus (P<0,01) aufwies; im Vergleich zur Modellgruppe zeigte die HYXQ-Gruppe eine signifikante Verringerung der Beclin1- und LC3Ⅱ/LC3Ⅰ-Expression (P<0,01) und eine signifikante Erhöhung von p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt und p-mTOR/mTOR (P<0,01). Die LY294002-Gruppe zeigte eine deutliche Erhöhung der Beclin1- und LC3Ⅱ/LC3Ⅰ-Expression (P<0,05, P<0,01) und eine signifikante Verringerung von p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt und p-mTOR/mTOR (P<0,01); im Vergleich zur LY294002-Gruppe zeigte die HYXQ+LY294002-Gruppe eine signifikante Verringerung der Beclin1- und LC3Ⅱ/LC3Ⅰ-Expression (P<0,01) und eine signifikante Erhöhung von p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt und p-mTOR/mTOR (P<0,01). Schlussfolgerung: Die Formulierung zur Beseitigung von Blutergüssen und Entgiftung schützt BMECs vor OGD-bedingten Schäden, vermutlich durch Aktivierung des PI3K/Akt/mTOR-autophagischen Signalwegs, wodurch eine Überexpression der Autophagie gehemmt wird und das Occludin-Protein sowie die Endothelbarrierefunktion geschützt werden.

Gehirn-Mikrogefäß-Endothelzellen; Autophagie; Formulierung zur Beseitigung von Blutergüssen; Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K); Proteinkinase B (Akt)