Analyse des Wirkmechanismus der Nieren-Yishui-Kapsel-modifizierten BMSC-Extrazellularvesikel zur Regulation des miR-15b/Wnt-Signalwegs und zur Förderung der Differenzierung und Reifung von OLN-93-Oligodendrozyten

LIU Sisi ,  

LI Chunyu ,  

LI Chen ,  

LI Haixin ,  

WANG Lei ,  

摘要

Ziel ist es, die Rolle der mit dem Nieren-Yishui-Kapsel (BSYS) notfallbehandelten Knochenmarkmesenchymalen Stammzell-Extrazellulären Vesikel (BMSC-exos) bei der Regulation des miR-15b/Wnt-Signalwegs zur Förderung der Differenzierung und Reifung der OLN-93-Oligodendrozyten und dessen molekularen Mechanismus zu untersuchen. Die OLN-93-Zellen wurden in die Normalgruppe (NC), die BMSC-exos-Gruppe, die BSYS-BMSC-exos-Gruppe, die BSYS-BMSC+LV-miR-15b-5p-Inhibitor-exos-Gruppe und die BSYS-BMSC+LV-miR-15b-5p-NC-exos-Gruppe unterteilt. Benutzung von DiR-Färbung markiert Exos, um die Zellzufuhr einer OLN-93 zu beobachten; Die Zellproliferations- und -aktivitätstests mit dem CCK-8 wurden durchgeführt, um die wirksame Dosis von BSYS-BMSC-exos für OLN-93-Zellen zu bestimmen. Stabile Stämme der BMSCs wurden durch Lentivirus-Transfektion zur Hemmung der Expression von miR-15b-5p in BMSCs und ihren Exos hergestellt, und die Real-time-PCR wurde verwendet, um die Expression von miR-15b-5p und Wnt3a in OLN-93-Zellen zu überprüfen; Western-Blot wurde verwendet, um die Expression von 2 ', 3'-Cyclisches Nukleotid 3'-Phosphat-Diesterase (CNPase) und Myelin-assoziierter glykoprotein (PLP) in OLN-93-Zellen zu überprüfen. Real-time-PCR und Western-Blot wurden verwendet, um die Expressionsniveaus von Wnt/β-catenin-Signalweg-Glykogen-Synthase-Kinase-3β (GSK-3β), β-catenin und T-Zell-spezifischer Transkriptionsfaktor 4/7-Like 2 (TCF4/TCF7L2) in OLN-93-Zellen zu überprüfen. Die mit DiR-Färbung markierten Exos können von OLN-93-Zellen erfolgreich aufgenommen werden. Die CCK-8-Testergebnisse zeigten, dass 20 mg·L-1 von BSYS-BMSC-exos die Zellaktivität von OLN-93 am besten erhöhten (P<0,01) und als Folgebehandlungsdosis. Nach der Lentivirus-Transfektion von BMSCs zeigten die Resultate von Real-time-PCR, dass die miR-15b-5p in BMSCs (P<0,01) und in ihren Exos (P<0,01) signifikant unterdrückt wurde. Die ICC-Ergebnisse zeigten, dass BSYS-BMSC-exos die Anzahl der differenzierten und reifen CNPase und PLP-Zellen erhöhen können (P<0,01); Die Western-Blot-Ergebnisse zeigten, dass BSYS-BMSC-exos die Proteinexpression von CNPase und PLP erhöhen können (P<0,01). BSYS-BMSC-exos können auch die Expression von miR-15b-5p und phosphoryliertem (p)-β-catenin-Protein in OLN-93-Zellen erhöhen; Verringern Sie die mRNA- und Proteinexpression von Wnt3a, die mRNA-Expression von β-catenin und TCF4/TCF7L2 sowie die p-GSK-3β (Ser9)-Proteinexpression (P<0,05, P<0,01). Nach der Übertragung von miR-15b-5p-Inhibitor in die BSYS-BMSC-exos wird die Wirkung der obigen deutlich verringert (P<0,05, P<0,01). Schlussfolgerungen: BSYS-BMSC-exos fördern die Differenzierung und Reifung von OLN-93-Oligodendrozyten und der Mechanismus besteht darin, dass die OLN-93 die Expression von miR-15b-5p steigert und die Expression von Wnt3a hemmt, um den Wnt-Signalweg zu hemmen.

关键词

Multiple Sklerose;Nieren-Yishui-Kapsel;Knochenmarkmesenchymale Stammzell-Extrazellularvesikel;OLN-93-Oligodendrozyten;Mikro-Ribonukleinsäure (miRNA);miR-15b/Wnt-Signalweg

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