Ziel der Studie ist es, zu untersuchen, ob die Huanglian Jiedu Tang-Suppe die Infiltration von Neutrophilen im Gehirn von Mäusen mit mittlerer Hirnarterienverschluss (MCAO) durch die Regulation der Expression neutrophilassoziierter Chemokine in Exosomen hemmen und somit eine therapeutische Wirkung erzielen kann. Methode: 130 männliche SPF C57BL/6J-Mäuse wurden zufällig in 4 Gruppen eingeteilt: Sham-Operationsgruppe, MCAO-Modellgruppe, Huanglian Jiedu Tang-Gruppe (6 g·kg^-1) und Jinnaduo-Gruppe (21,6 mg·kg^-1), wobei die Jinnaduo-Gruppe 10 Mäuse umfasste, die anderen drei Gruppen jeweils 40 Mäuse. Die Huanglian Jiedu Tang- und Jinnaduo-Gruppen erhielten täglich per oraler Gabe ein Volumen von 0,15 mL·(10 g)^-1 des jeweiligen Medikaments über 7 Tage, während die Sham- und Modellgruppen die gleiche Menge physiologische Kochsalzlösung auf gleichem Weg erhielten. Nach 7 Tagen wurde bei den Mäusen die MCAO-Operation durchgeführt, indem distale und proximale Enden der rechten Arteria carotis communis (CCA) abgebunden, ein kleiner Schnitt zwischen den Ligaturen gesetzt und ein mit Silikon beschichteter Monofilamentfaden mit abgerundetem Kopf eingebracht wurde, um die Arterie zu blockieren. Der Faden blieb 1 Stunde liegen, um ein fokales Hirnischämie-Modell zu erzeugen. 24 Stunden nach der Modellierung wurden neurologische Funktionsstörungen anhand der Longa-Punkte bewertet, das Hirninfarktvolumen mit TTC-Färbung gemessen, der Hirndurchblutung mit Laser-Speckle-Imaging beobachtet, histopathologische Veränderungen des Hirngewebes mit Hämatoxylin-Eosin (HE)- und Nissl-Färbung untersucht. Exosomen wurden durch Ultrazentrifugation aus Plasma und Gehirngewebe isoliert und nach Größe getrennt, mittels Transmissions-Elektronenmikroskopie (TEM), Partikelgrößenmessung und Western Blot identifiziert. Längskettige RNA aus Exosomen wurde für Bibliothekskonstruktion und Sequenzierung verwendet. Echtzeit-PCR wurde zur Bestimmung der mRNA-Expression von Entzündungs- und neutrophilassoziierten Chemokinen in Exosomen aus Plasma und Hirngewebe durchgeführt. ELISA quantifizierte die Proteinexpression, und Immunhistochemie detektierte die neutrophilspezifische Myeloperoxidase (MPO) im Gehirn. Ergebnisse: Im Vergleich zur Sham-Gruppe zeigten die Modellgruppe signifikant niedrigere neurologische Scores (P<0,01), ausgeprägten Hirninfarkt (P<0,01), deutlich verminderte Hirndurchblutung (P<0,01), Zellnekrosen im Gehirn und eine signifikante Verminderung der Nissl-Körperchen (P<0,01). Die mRNA-Expression von IL-1β, MPO, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL10, CCL2 und CCL3 in Exosomen aus Plasma und Hirngewebe war deutlich erhöht (P<0,05, P<0,01); die Proteinexpression von IL-1β, MPO, CXCL2 und CXCL10 in Gehirn-Exosomen nahm deutlich zu (P<0,05, P<0,01). Die MPO-Positivitätsrate und die mittlere optische Dichte im Gehirn stiegen signifikant an (P<0,01). Im Vergleich zur Modellgruppe steigerten die Huanglian Jiedu Tang- und Jinnaduo-Gruppen signifikant die neurologischen Scores (P<0,05), reduzierten das Infarktvolumen deutlich (P<0,01), verbesserten die Hirndurchblutung signifikant (P<0,01), verringerten nekrotische Zellen und erhöhten Nissl-Körperchen (P<0,01). In der Huanglian Jiedu Tang-Gruppe wurde die mRNA-Expression der genannten Faktoren in Exosomen aus Plasma und Gehirngewebe signifikant gesenkt (P<0,05, P<0,01); die Proteinexpression in Gehirn-Exosomen sowie MPO-Positivität und optische Dichte im Gehirn nahmen deutlich ab (P<0,01). Schlussfolgerung: Die Huanglian Jiedu Tang-Suppe kann die Expression neutrophilassoziierter Chemokine in Exosomen aus Plasma und Gehirngewebe von MCAO-Mäusen effektiv regulieren, wodurch die Neutrophileninfiltration im Gehirn reduziert und eine therapeutische Wirkung erzielt wird.

Huanglian Jiedu Tang;ischämischer Schlaganfall;Exosomen;Chemokine;Neutrophileninfiltration