Effet de la combinaison de la décoction d'Artemisia annua et de la décoction de Poria cocos sur la culture in vitro des cellules Treg/Th17 chez les patients atteints d'insuffisance hépatique aiguë sévère liée au virus de l'hépatite B
Étude sur l'effet de la combinaison de la décoction d'Artemisia annua et de la décoction de Poria cocos sur la régulation de l'expression des lymphocytes T régulateurs (Treg) / lymphocytes T auxiliaires 17 (Th17) chez les patients atteints d'insuffisance hépatique aiguë sévère liée au virus de l'hépatite B (HBV-ACLF) en culture in vitro. Méthodes de collecte du sang périphérique frais de patients atteints de HBV-ACLF et de séparation des mononucléaires, à travers la séparation primaire des Treg et des cellules T CD4 naïves par la méthode des billes magnétiques et l'expansion in vitro des cellules T CD4 naïves induisant leur différenciation en cellules Th17, préparation de décoction claire (décoction d'Artemisia annua), de décoction chaude (décoction de Poria cocos) et de combinaison de décoctions claires et chaudes (décoction d'Artemisia annua et décoction de Poria cocos, c'est-à-dire le traitement clair-chaud de dissipation de toxines et de résorption des stases de la chaleur et de la stase sanguine) ainsi que de plasma sanguin blanc (solution saline physiologique), mise en place d'un groupe témoin blanc, d'un groupe de traitement clair (5,04 g·kg-1), d'un groupe de traitement chaud (6,21 g·kg-1), d'un groupe de traitement clair-chaud (17,1 g·kg-1), et traitement des cellules de chaque groupe par le plasma correspondant. Utilisation de la cytométrie en flux pour détecter la fréquence des cellules Treg/Th17, de l'ELISA pour détecter le taux d'expression du facteur de croissance transformant-β (TGF-β), de la technologie de capture des billes de cytométrie en flux (CBA) pour détecter le taux d'expression de l'interleukine (IL)-10, de l'IL-17A, du facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α), de l'IL-23, de la réaction en chaîne de la polymérase quantitative en temps réel (PCR) pour détecter l'expression de l'ARNm de la protéine régulatrice de l'activation transcriptionnelle de Forkhead box P3 (FoxP3) et de la protéine régulatrice du récepteur nucléaire du récepteur des rétinoïdes-γt (ROR-γt, ainsi que de l'immunodétection de la protéine (Western blot) pour détecter l'expression des protéines FoxP3 et ROR-γt. Après l'intervention des décoctions claires, chaudes et clair-chaudes, comparativement au groupe témoin, la fréquence des cellules Treg et Th17 du groupe clair-chaud a diminué, ainsi que l'expression des facteurs TGF-β et IL-10 des cellules Treg, et des facteurs TNF-α, IL-17A, IL-23 des cellules Th17 a diminué de manière significative, tout comme l'expression de l'ARNm de FoxP3 et ROR-γt et l'expression des protéines (P<0.01) ; comparé au groupe clair, la fréquence des cellules Treg, l'expression de l'ARNm de FoxP3 et des protéines a diminué dans le groupe clair-chaud, mais la différence n'était pas statistiquement significative, tout comme la fréquence des cellules Th17, et l'expression des facteurs TGF-β, IL-10, des cellules Treg, ainsi que des facteurs TNF-α, IL-17A, IL-23 des cellules Th17 a diminué, ainsi que l'expression de l'ARNm de ROR-γt et les protéines (P<0.05, P<0.01) ; comparé au groupe chaud, la fréquence des cellules Treg, l'expression de l'ARNm de FoxP3 et des protéines a diminué dans le groupe clair-chaud, mais la différence n'était pas statistiquement significative, tout comme la fréquence des cellules Th17, et l'expression des facteurs TGF-β, IL-10, des cellules Treg, ainsi que des facteurs TNF-α, IL-17A, IL-23 des cellules Th17 a diminué, ainsi que l'expression de l'ARNm de ROR-γt et les protéines (P<0.05). Conclusion : La combinaison de décoctions claires et chaudes peut réguler la transcription spécifique des cellules Treg et Th17, inhiber l'activation excessive des cellules Treg et Th17, réduire la sécrétion des facteurs cellulaires TGF-β, IL-10, TNF-α, IL-17A, IL-23, atténuant ainsi la réaction inflammatoire de l'insuffisance hépatique et améliorant le pronostic des patients.
关键词
insuffisance hépatique aiguë sévère liée au virus de l'hépatite B;lymphocytes T régulateurs (Treg);lymphocytes T auxiliaires 17 (Th17);réaction inflammatoire;traitement clair-chaud