Effect of Huangqin Qingre Chubi Capsules-containing Serum on CircRNA_0001543/NF-κB Expression in Co-cultured PBMCs and Human FLSs from Patients with Ankylosing Spondylitis
Objectifs L'objectif de l'étude était d'analyser l'effet du sérum de capsules de décoction de scutellaire chinoise (HQC) sur les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMCs) et les cellules synoviales fibroïdes (FLSs) des patients atteints de spondylarthrite ankylosante (AS) après co-culture de cellules sur l'expression de circRNA_0001543/NF-κB. Méthodes Prélèvement de sang veineux chez les patients atteints de AS, isolement et extraction des PBMCs; co-culture des FLSs avec les PBMCs des patients atteints de AS, collecte des FLSs après co-culture pour l'expérience subséquente. Le groupe témoin était constitué de FLSs normales, le groupe modèle était constitué de PBMCs et FLSs cultivées simulées de l'état pathologique AS, le groupe de capsules de décoction de scutellaire chinoise était constitué de cellules co-cultivées avec du sérum de capsules de décoction de scutellaire chinoise (6,48 g · kg -1). L'étude de l'effet du sérum HQC sur la viabilité des cellules co-cultivées a été divisée en groupe témoin, groupe 10% HQC, groupe 20% HQC, groupe 30% HQC. Étude de l'impact de la meilleure concentration sérique sur les voies cellulaires, les paramètres de voies, l'expérience était divisée en groupe témoin, groupe modèle, groupe de la meilleure concentration sérique HQC. Confirmation de l'effet de transfection de plasmide perturbateur CircRNA_0001543, l'expérience était divisée en groupe témoin, groupe si-NC (ajout d'agent de transfection), groupe si-circ_0001543-1 (ajout d'agent de transfection et d'interférence de transfection circ_0001543 plasmide 1), groupe si-circ_0001543-2 (ajout d'agent de transfection et d'interférence de transfection circ_0001543 plasmide 2), groupe si-circ_0001543-3 (ajout d'agent de transfection et d'interférence de transfection circ_0001543 plasmide 3). Confirmation de l'effet de transfection de plasmide d'excès CircRNA_0001543, l'expérience était divisée en groupe témoin, groupe OE-NC (ajout d'agent de transfection), groupe OE-circ_0001543 (ajout d'agent de transfection et transfection excès circ_0001543 plasmide). Étude de l'impact de l'interférence / excès de CircRNA_0001543 sur les facteurs cellulaires, les paramètres de voies, l'expérience était divisée en groupe si-NC, groupe si-CircRNA_0001543, groupe OE-NC, groupe OE-CircRNA_0001543. Utilisation de la méthode d'analyse immunoenzymatique liée à l'enzyme (ELISA) pour détecter les niveaux de l'interleukine (IL)-1β, IL-10, IL-37 et l'expression du facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α); Utilisation de la réaction de polymérase en chaîne en temps réel pour détecter l'expression des gènes associés au circRNA_0001543, à l'IκBα et au NF-κB p65. Les résultats indiquent qu'après 48 heures, le sérum de capsules de décoction de scutellaire chinoise à 30% a considérablement inhibé la prolifération des cellules co-cultivées AS PBMCs et FLSs, ce qui en fait la concentration sérique optimale pour l'expérience ultérieure. Par rapport au groupe témoin, dans le groupe modèle, l'expression de NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α a considérablement augmenté (P<0,01), l'expression de circRNA_0001543 mRNA, IL-10, IL-37 a considérablement diminué (P<0,01). Par rapport au groupe modèle, dans le groupe de sérum de capsules de décoction de scutellaire chinoise, l'expression de NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α a considérablement diminué (P<0,05), l'expression de circRNA_0001543 mRNA, IL-10, IL-37 a considérablement augmenté (P<0,05); et la différence était la plus évidente dans le groupe de 30% de sérum (P<0,01). Par rapport au groupe si-NC, l'expression de circRNA_0001543 dans le groupe si-CircRNA_0001543-3 a considérablement diminué (P<0,01); par rapport au groupe OE-NC, l'expression de circRNA_0001543 dans le groupe OE-CircRNA_0001543 a considérablement augmenté (P<0,01), indiquant que la transfection du plasmide perturbateur circRNA_0001543 a réussi. Sur la base de la concentration sérique optimale de sérum de capsules de décoction de scutellaire chinoise, après interférence de si-CircRNA_0001543, l'expression de NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α a considérablement augmenté (P<0,01), l'expression de IL-10, IL-37 a considérablement diminué (P<0,01); après excès de OE-CircRNA_0001543, l'expression de NF-κB p65 mRNA, IκBα mRNA, IL-1β, TNF-α a considérablement diminué (P<0,01), l'expression de IL-10, IL-37 a considérablement augmenté (P<0,01). Conclusions Le sérum de capsules de décoction de scutellaire chinoise peut réguler la voie NF-κB en augmentant l'expression de circRNA_0001543, supprimer les facteurs inflammatoires, augmenter l'expression d'anti-inflammatoires, améliorant ainsi les processus immuno-inflammatoires de l'AS.