Mechanism of Xiayuxue Tang in Inhibiting Hepatocellular Carcinoma Cells by Regulating YAP1/SIRT5 Signaling Axis to Mediate Succinate Metabolism and Succinylation
Le but: étudier la régulation du métabolisme de l'acide succinique et l'inhibition des cellules cancéreuses du foie par le sang. Méthodes: Préparer du sang contenant du sang; Utilisation de la méthode de vérification de l'activité de prolifération cellulaire (CCK-8) pour observer l'effet de différentes concentrations d'acide succinique sur la prolifération des cellules HepG2, MHCC97H et détermination de la concentration expérimentale ultérieure; Utilisation ultérieure de la méthode CCK-8 pour vérifier l'effet du sang contenant du sang (5%, 10%, 15%) sur la prolifération des cellules HepG2, MHCC97H; Vérifier l'effet du sang contenant du sang (5%, 10%, 15%) sur la prolifération des cellules HepG2, MHCC97H, la période, la migration, l'invasion et l'apoptose à l'aide de la cytologie en flux, des essayages de grattage et de l'expérience Transwell; Changement du métabolisme de l'acide succinique et de l'acétylation de l'acide succinique en déterminant la concentration d'acide succinique, en déterminant l'activité de la succinate déshydrogénase (SDH) et en utilisant la méthode d'identification des protéines (western blot) ; Réaction en chaîne de la polymérase en temps réel quantitatif en utilisant la PCR en temps réel, western blot pour déterminer l'expression de la protéine associée à Yes et de l'information 5 (SIRT5); Appliquer le docking moléculaire pour vérifier la liaison des composants majeurs du sang aux protéines cibles. Résultats: Comparé au groupe témoin, 1 à 2 mmol/L d'acide succinique favorise considérablement la prolifération des cellules HepG2, MHCC97H (P<0,01) ; Comparé au groupe témoin, le sang contenant du sang (5%, 10%, 15%) inhibe considérablement la prolifération des cellules HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01) ; Comparé au groupe témoin, le sang contenant du sang (5%, 10%, 15%) inhibe considérablement la prolifération des cellules HepG2, MHCC97H, leur migration, leur invasion et induit l'apoptose de cellules HepG2, MHCC97H (P<0,01) ; De plus, par rapport au groupe sanguin, le sang (5%, 10%, 15%) avec de l'acide augmente considérablement le niveau de prolifération des cellules HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01), la capacité de migration et d'invasion (P<0,05, P<0,01), diminue le pourcentage de cellules en phase G0/G1 (P<0,01) et diminue le niveau d'apoptose des cellules (P<0,01). En ce qui concerne le métabolisme de l'acide succinique, par rapport au groupe témoin, le sang contenant du sang (5%, 10%, 15%) ; réduit le niveau d'acide succinique dans les cellules HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01), augmente l'activité de la SDH (>0,01) et réduit considérablement le niveau d'acétylation de l'acide succinique. En ce qui concerne le chemin YAP1/SIRT5, par rapport au groupe témoin, le sang contenant du sang (5%, 10%, 15%) après l'intervention réduit considérablement l'ARNm et l'expression protéique YAP1 dans les cellules HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01), tandis que l'expression de l'ARNm et de la protéine SIRT5 augmente considérablement (P<0,05, P<0,01). Les résultats du docking moléculaire montrent une bonne capacité de liaison entre YAP1 et SIRT5, ainsi qu'entre les principaux composants actifs du sang et YAP1, SIRT5. Conclusion: Le sang s'épaissit en régulant l'axe signal YAP1/SIRT5, en intervenant dans le métabolisme de l'acide succinique et l'acétylation de l'acide succinique, en renforçant l'effet inhibiteur sur les cellules cancéreuses du foie.
关键词
hepatocellular carcinoma;Xiayuxue Tang;succinate;succinylation;yes-associated protein 1 (YAP1);sirtuin 5 (SIRT5)