Détection moléculaire quantitative des matériaux médicinaux d’angélique et de leurs produits transformés basée sur la méthode Herb-Q

ZHANG Mingyu ,  

JIANG Wenjun ,  

JI Baoyu ,  

WANG Yue ,  

ZHANG Haitao ,  

ZHANG Haobo ,  

FENG Xue ,  

LI Xiwen ,  

摘要

Objectif : L’angélique (当归), plante médicinale et alimentaire couramment utilisée en grande quantité, fait fréquemment l’objet de falsifications sur le marché, affectant gravement l’efficacité clinique des préparations. Aujourd’hui, les techniques d’identification qualitative des contrefaçons sont relativement matures, mais il n’existe pas encore de méthodes de détection quantitative des contrefaçons dans les produits transformés. Cette étude utilise comme exemple l’angélique et son principal proche taxon facilement falsifié, "l’angélique terrestre" (朝鲜当归), pour mener une recherche de détection quantitative visant à établir une méthode moléculaire de détection quantitative des plantes médicinales et de leurs produits transformés (Herb-Q), fournissant une démonstration pour l’établissement de techniques de détection quantitative du matériel médicinal d’angélique et de produits de santé associés. La méthode repose sur la sélection de sites polymorphes nucléotidiques simples (SNP) spécifiques à l’angélique et à l’angélique coréenne basés sur le séquençage complet du chloroplastome. Des sites spécifiques à l’angélique ont été choisis pour une étude méthodologique quantitative utilisant des mélanges de poudres de plantes à différents taux de contamination (linéarité, limites de quantification, limites de détection et reproductibilité). Trois taux différents de contamination (15 %, 25 %, 35 %) dans une poudre active pour la circulation sanguine et le soulagement de la douleur ont été utilisées pour valider la précision de la méthode Herb-Q dans la détection quantitative de médicaments chinois contenant de l’angélique. Résultats : Après comparaison de 123 séquences de chloroplastomes du genre Angélique, basées sur la conservation intra-espèces, la spécificité inter-espèces et les exigences du séquençage haut débit par pyrophosphate, les positions 9674 (A/G) dans la séquence NC_042826.1 et 38592 (T/C) dans NC_029393.1 ont été identifiées comme des sites moléculaires spécifiques à l’angélique et à l’angélique coréenne respectivement. Le site spécifique à l’angélique à la position 9674 (A/G) a été choisi pour établir la relation linéaire de la méthode Herb-Q avec un coefficient de détermination R² de 0,9974 (R² > 0,99), indiquant une bonne linéarité. Les limites de quantification et de détection étaient de 2,0 %, la reproductibilité était bonne [écart-type relatif (RSD) < 2,0 %]. Le système de détection quantitative construit sur la méthode Herb-Q a permis de détecter le taux d’introduction d’angélique coréenne contrefaite dans la poudre active, avec une déviation moyenne répétée de 1,3 %. Conclusion : L’étude montre que la méthode de détection quantitative Herb-Q basée sur le site 9674 (A/G) du chloroplastome NC_042826.1 de l’angélique a une bonne applicabilité, objectivité et précision pour l’angélique et "l’angélique terrestre" ainsi que leurs produits transformés, pouvant fournir un support technique pour la détection quantitative des produits dérivés d’angélique sur le marché, tels que les préparations médicinales chinoises, les compléments alimentaires et les produits de santé.

关键词

méthode de détection moléculaire quantitative des plantes médicinales (Herb-Q) ; angélique ; falsification ; séquençage par pyrophosphate ; recherche quantitative

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