Effet de la perception d'Apaf1 des voies d'apoptose/pyroptose médiées par MPT sur le dépôt lipidique hépatique et intervention de la soupe Diti Tang

ZHU Jingxuan ,  

SONG Nan ,  

LIU Yu ,  

DONG Yuanguang ,  

JIA Lianqun ,  

PEI Yupeng ,  

摘要

L'objectif est d'examiner si la soupe Diti Tang (DTT) améliore la dépôts lipidiques dans les hépatocytes induite par l'acide oléique (OA) en régulant le facteur activateur de la caspase 1 (Apaf1) qui perçoit la transition de perméabilité mitochondriale (MPT) médiant les voies d'apoptose/pyroptose. Méthode : les cellules de carcinome hépatocellulaire humain (HepG2) ont été induites avec 800 μmol/L d’OA pour établir un modèle de dépôt lipidique hépatique. Les conditions d'intervention optimales avec le sérum contenant DTT et l'inhibiteur Apaf1 ZYZ488 ont été sélectionnées via un test de prolifération et de viabilité cellulaire (CCK-8). Les cellules HepG2 ont été divisées en groupe témoin, groupe OA (800 μmol/L), groupe OA (800 μmol/L) + sérum témoin (SC) (10 %), groupe OA (800 μmol/L) + DTT (10 %), groupe OA (800 μmol/L) + ZYZ488 (1 μmol/L). Les changements dans le dépôt lipidique hépatique ont été évalués par coloration à l'huile rouge O, la mesure des triglycérides (TG) et des acides gras libres non estérifiés (NEFA) ; ouverture du pore de transition de perméabilité mitochondriale (MPTP) et changement du potentiel membranaire mitochondrial détectés par coloration fluorescente Calcein AM et JC-1 ; nombre de cellules en apoptose et pyroptose détecté par cytométrie en flux ; expression d'Apaf1, GSDME, PARP1, Caspase-3, Caspase-4, Caspase-9 par PCR quantitative en temps réel; expression d'Apaf1 par immunofluorescence; analyse des protéines Apaf1, GSDME, PARP1, Caspase-3, Caspase-4, Caspase-9, Caspase-3 clivé et Caspase-9 clivé par Western blot. Résultats : le sérum contenant DTT réduit significativement les niveaux de TG et NEFA induits par OA dans les cellules HepG2 (P<0,01) et améliore efficacement l'accumulation des gouttelettes lipidiques dans les hépatocytes. Le sérum DTT inhibe également l'ouverture excessive de MPT et la diminution du potentiel membranaire mitochondrial (P<0,01). De plus, il réduit de manière significative l'expression des protéines clés et des ARNm des voies d'apoptose (Caspase-9/Caspase-3/PARP1) et de pyroptose (Caspase-4/Caspase-3/GSDME) médiées par Apaf1 (P<0,05), avec un effet similaire à celui de ZYZ488. Conclusion : la soupe Diti Tang améliore le dépôt lipidique hépatique en inhibant les voies d'apoptose et de pyroptose médiées par la détection de MPT par Apaf1.

关键词

dépôt lipidique hépatique;soupe Diti Tang;facteur activateur de la caspase 1 (Apaf1);pore de transition de perméabilité mitochondriale (MPT);apoptose;pyroptose

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