L'objectif est d'étudier l'effet et le mécanisme de la poudre Taishan Panshi (TSPSP) dans l'inhibition des lésions oxydatives des cellules du trophoblaste humain (HTR-8/SVneo) et de comprendre le mécanisme thérapeutique du TSPSP dans l'avortement spontané (SA). Les méthodes ont utilisé une base de données clinique (GEO) pour analyser la différence génétique dans SA et son association avec le stress oxydatif. La pharmacologie réseau a été utilisée pour filtrer les composants actifs de TSPSP et construire un réseau "médicament chinois-composant-cible-maladie" pour prédire le mécanisme d'action de TSPSP. Des expériences in vitro ont divisé les cellules trophoblastiques HTR-8/SVneo en groupe contrôle, groupe modèle, groupes avec sérum contenant TSPSP à 2,5 %, 5 %, 10 % et groupe inhibiteur du facteur de transcription nucléaire E2 lié au facteur 2 (Nrf2) (ML385, 30 μmol/L). Excepté le groupe contrôle, les autres groupes ont été traités avec 150 μmol/L de H2O2 pendant 3 heures pour établir un modèle de stress oxydatif cellulaire. Après réussite du modèle, les groupes contrôle et modèle ont reçu 10 % de sérum témoin, tandis que les groupes avec sérum TSPSP ont reçu le sérum correspondant. Le groupe inhibiteur Nrf2 a reçu en plus 30 μmol/L de ML385 en présence de 10 % de sérum TSPSP. Les cellules ont été cultivées pendant 24 h dans ces conditions, puis les échantillons ont été collectés pour analyses ultérieures. La viabilité cellulaire a été mesurée par CCK-8 ; la migration cellulaire par test de griffure ; les contenus en malondialdéhyde (MDA), Fe2+, glutathion (GSH) par ELISA ; le niveau de ROS intracellulaire par sonde fluorescente (DCF-DA) ; l'expression des protéines KEAP1, Nrf2, FoxO3 et ARNm par immunofluorescence (IF) et PCR en temps réel ; l'expression protéique KEAP1, Nrf2, FoxO3, GPX4 et SOD par western blot. Les résultats issus des bases GEO (GSE76862 et GSE22490) ont montré une association des gènes KEAP1, Nrf2 et FoxO3 avec la maladie. Neuf voies différentielles significatives ont été identifiées (P<0,05), dont trois incluent Nrf2 et FoxO3. La pharmacologie réseau a identifié 246 cibles pour les composants actifs TSPSP et 2804 cibles liées au SA, avec 154 cibles potentielles en intersection. L'analyse topologique a montré des degrés élevés pour KEAP1 et Nrf2 ; l'enrichissement GO et KEGG a montré que les cibles communes participent principalement à la réponse au stress oxydatif, aux voies FoxO et MAPK. In vitro, la viabilité des cellules modélisées était significativement réduite par rapport au témoin (P<0,01) ; les groupes TSPSP présentaient une viabilité élevée (P<0,01) ; le groupe ML385 réduisait la viabilité à environ 70 % du groupe TSPSP 10 % (P<0,01). MDA, Fe2+ et ROS étaient augmentés et GSH réduit dans le groupe modèle (P<0,01), la migration cellulaire diminuait, tandis que KEAP1 et FoxO3 augmentaient en protéine et ARNm (P<0,01), et Nrf2, GPX4, SOD diminuaient (P<0,01). Par rapport au modèle, les groupes TSPSP présentaient une diminution significative de MDA, Fe2+ et ROS, une augmentation de GSH et de migration, une réduction de KEAP1 et FoxO3, et une élévation de Nrf2, GPX4, SOD (P<0,05, P<0,01). Le groupe ML385 inversait ces tendances (P<0,05, P<0,01). Conclusion : TSPSP inhibe les lésions oxydatives induites par H2O2 dans les cellules trophoblastiques, probablement via l'activation de la voie de signalisation KEAP1/Nrf2/FoxO3.

Poudre Taishan Panshi ; avortement spontané ; protéine Kelch-like ECH associée 1 / facteur nucléaire E2 lié 2 / protéine FoxO3 (KEAP1/Nrf2/FoxO3) ; trophoblaste humain ; lésions par stress oxydatif