Rôle et mécanisme de la tablette Qiangjin dans la régulation de la voie de signalisation Keap1/Nrf2 pour atténuer les lésions de stress oxydatif dans la varicocèle

DONG Liang ,  

YANG Fang ,  

ZHANG Jingyi ,  

TANG Xinyi ,  

LI Yulin ,  

YU Xujun ,  

CHANG Degui ,  

摘要

L'objectif est d'explorer le mécanisme par lequel la tablette Qiangjin améliore la fonction spermatogénique dans la varicocèle (VC) via la voie de signalisation Kelch-like ECH-associated protein 1 (Keap1)/ Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) médiant le stress oxydatif. Méthodes: 10 rats SD ont été répartis aléatoirement en groupe blanc et groupe modèle, la stabilité du modèle a été vérifiée par des examens pathologiques. 36 rats SD ont été répartis en six groupes: blanc, modèle, faible dose de Qiangjin (0,23 g·kg^-1), dose moyenne (0,46 g·kg^-1), dose élevée (0,92 g·kg^-1) et groupe Maiziling (61,7 mg·kg^-1), avec 6 rats par groupe. Le modèle expérimental de varicocèle expérimentale de la veine spermatique gauche (ELV) chez le rat a été établi par ligature partielle de la veine rénale gauche (imitation du syndrome du casse-noisette humain), les doses ont été administrées par gavage de manière continue pendant 28 jours, une fois par jour. Le modèle de culture testiculaire in vitro a été établi par chambre Transwell, avec intervention par sérum contenant Qiangjin (2,3, 4,6, 9,2 g·kg^-1). La morphologie du rein gauche a été observée au microscope, le diamètre de la veine spermatique gauche (LSV) a été mesuré au micromètre; le poids corporel hebdomadaire des rats a été enregistré, ainsi que le poids des épididymes et des testicules; les changements pathologiques des tissus testiculaires ont été observés par coloration hématoxyline-éosine (HE); les niveaux de testostérone et de radicaux libres réactifs à l'oxygène (ROS) dans le surnageant cellulaire et les tissus testiculaires ont été mesurés par dosage immuno-enzymatique (ELISA); la teneur en ROS a été analysée par cytométrie en flux; les analyses immunohistochimiques ont été faites pour Keap1, Nrf2, 3β-hydroxystéroïde déshydrogénase (3β-Hsd), protéine de liaison GATA-4 (Gata-4), récepteur tyrosine kinase oncogène (C-kit); la structure ultrastructurale des tissus a été observée par microscopie électronique en transmission (TEM); l'apoptose cellulaire a été détectée par marquage terminal in situ (TUNEL); les expressions de Keap1, Nrf2, glutathion S-transférase α2 (Gsta2), μ1 (Gstm1), hémoxygénase-1 (HO-1), quinone oxydoréductase 1 (Nqo1), thioredoxine réductase 1 (Txnrd1) ont été analysées par PCR quantitative en temps réel et par Western blot. Résultats: comparé au groupe blanc, le groupe modèle a montré une augmentation significative du contenu en ROS et du pourcentage de cellules apoptotiques (P<0,01), une diminution notable de la concentration de testostérone (T) (P<0,01), une augmentation significative de l'expression de l'ARNm et de la protéine Keap1 (P<0,01), une baisse notable de l'expression de Nrf2, Gsta2, Gstm1, HO-1, Nqo1 et Txnrd1 (P<0,05). Par rapport au groupe modèle, les groupes traités par Qiangjin à différentes doses ont présenté une diminution significative du contenu en ROS et du pourcentage de cellules apoptotiques (P<0,05), une réduction significative de l'expression de l'ARNm et de la protéine Keap1 (P<0,05), et une augmentation notable de l'expression de Nrf2, Gsta2, Gstm1, HO-1, Nqo1 et Txnrd1 (P<0,05). Conclusion: Le mécanisme par lequel Qiangjin améliore la fonction spermatogénique dans la varicocèle est lié à la régulation de la voie de signalisation Keap1/Nrf2 et à l'atténuation des lésions dues au stress oxydatif.

关键词

Varicocèle; médecine traditionnelle chinoise; lésions dues au stress oxydatif; protéine associée à l'époxyde de type Kelch 1 (Keap1)/ facteur nucléaire E2 apparenté facteur 2 (Nrf2) voie de signalisation; modèle expérimental in vitro

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