Étude tridimensionnelle "Caractérisation microscopique - Analyse chimique - Évaluation pharmacologique" du principe d'amélioration de l'action de l'Atractylodes traité à la terre sur le renforcement de la rate et l'arrêt de la diarrhée

SHAN Guoshun ,  

XIAO Yuyan ,  

YUAN Chu ,  

CHEN Xiuai ,  

ZHAO Qimiao ,  

LIU Xiang ,  

WU Hao ,  

ZHANG Ke ,  

LIU Siqi ,  

YU Yongduo ,  

摘要

L'objectif est d'analyser les changements dans la microstructure, la composition chimique et l'effet anti-ulcéreux sur la colite ulcéreuse (UC) avant et après le traitement à la terre de l'Atractylodes macrocephala (白术), afin d'élucider le principe d'amélioration de l'action "renforcer la rate et arrêter la diarrhée" par ce traitement. La méthode utilise la microscopie électronique à balayage couplée à la spectroscopie à dispersion d'énergie (SEM-EDS) pour analyser la microstructure et la composition élémentaire avant et après le traitement à la terre, explorant les différences et leurs causes ; l'analyse chimique et l'identification des composés dans l'Atractylodes brute et traitée ont été réalisées par chromatographie liquide ultra-efficace couplée à un spectromètre de masse quadrupolaire à temps de vol (UPLC-Q-TOF-MS) avec la plateforme d'analyse des produits naturels UNIFI 1.9.2, combinées à l'analyse en composantes principales (PCA) et à l'analyse discriminante par moindres carrés partiels orthogonaux (OPLS-DA) pour étudier les différences et origines des composants chimiques ; un modèle murin d'UC a été développé avec le dextran sulfate de sodium (DSS), l'indice d'activité de la maladie (DAI) a été utilisé pour évaluer la gravité de l'inflammation intestinale, les modifications histopathologiques du côlon ont été observées par coloration à l'hématoxyline-éosine (HE), les niveaux de cytokines inflammatoires ont été mesurés par ELISA, l'expression des gènes clés et des protéines de la barrière muqueuse intestinale a été analysée par PCR en temps réel et Western blot, la diversité du microbiote intestinal a été évaluée par technologie 16S rRNA, et les niveaux d'acides gras à chaîne courte (SCFAs) dans les selles ont été étudiés par chromatographie en phase statique-gaz couplée à la spectrométrie de masse (HS-GC-MS). Sur la base de ces résultats, l'effet du traitement à la terre sur les barrières biologique, chimique, mécanique et immunitaire chez les animaux modèles a été exploré, ainsi que les différences et mécanismes d'action sur la régulation de la barrière mucosale intestinale des souris UC. Résultats : L'observation SEM a révélé une grande quantité de particules de terre au centre focal sur la surface de l'Atractylodes traité, accompagnée de gonflements en forme de bulles, ainsi que de nombreuses fissures et plis à la surface de la terre auxiliaire. L'analyse EDS a montré que les éléments Si, Al, Mg, Ca étaient significativement augmentés dans l'Atractylodes traité comparé au brut, ces éléments étant les principaux composants de la terre focalisée. Par UPLC-Q-TOF-MS avec comparaison aux bases de données, 132 composés chimiques ont été identifiés en mode ion positif, principalement des terpènes, des polyphénols et des acides aminés, et 40 en mode ion négatif, principalement des polyphénols et des glycosides. Les sesquiterpènes et les acides polyphénoliques ont montré des variations notables avant et après traitement. L'Atractylodes traité peut réduire le score DAI des souris UC, atténuer le raccourcissement du côlon, diminuer les niveaux sériques de cytokines pro-inflammatoires telles que IL-17, IL-18, IFN-γ, TNF-α, augmenter les cytokines anti-inflammatoires sIgA, IL-10, IL-4, TNF-β, accroître l'expression des gènes et protéines clés de la barrière intestinale (ZO-1, Occludin, Claudin-1, MUC2), améliorer la diversité du microbiote intestinal et les niveaux de SCFAs (P<0.05, P<0.01). L'Atractylodes brut et légèrement torréfié ont des effets similaires mais plus faibles, et la terre auxiliaire a également un certain effet. Conclusion : Le traitement à la terre renforce la protection de l'Atractylodes sur la barrière mucosale intestinale des souris UC, ce qui est causé par la double action des changements internes de la microstructure et de la composition chimique dus à la chaleur, ainsi que l'adsorption par la terre auxiliaire.

关键词

Atractylodes macrocephala;Méthode de traitement à la terre;Caractérisation microscopique;Microscopie électronique à balayage - Spectroscopie à dispersion d'énergie (SEM-EDS);Analyse chimique;UPLC-Q-TOF-MS;Barrière mucosale intestinale;Principe de traitement

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