L'objectif est d'explorer le mécanisme d'action de la décoction Zhuluantang dans l'inhibition de l'autophagie excessive des cellules granulosa humaines de l'ovaire (KGN) et l'amélioration de l'insuffisance ovarienne prématurée (POI) via la voie de signalisation phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/protéine kinase B (Akt)/protéine cible de la rapamycine (mTOR). Méthodes : La concentration optimale de cyclophosphamide sur les cellules KGN pour établir un modèle cellulaire POI a été déterminée par le test CCK-8. En se basant sur cela, l'effet des sérums médicamenteux contenant la décoction Zhuluantang sur la viabilité du modèle cellulaire KGN a été examiné. Après détermination de la meilleure concentration d'administration, les cellules KGN ont été divisées en groupes : groupe contrôle (20 % de sérum vide), groupe modèle (20 % de sérum vide + 5 μmol·L^-1 cyclophosphamide), groupe sérum médicamenteux Zhuluantang (20 % de sérum médicamenteux Zhuluantang + 5 μmol·L^-1 cyclophosphamide), groupe inhibiteur d'autophagie (20 % de sérum vide + 5 μmol·L^-1 cyclophosphamide + 20 μmol·L^-1 hydroxychloroquine phosphate), groupe inhibiteur d'autophagie + sérum médicamenteux Zhuluantang (20 % de sérum médicamenteux Zhuluantang + 5 μmol·L^-1 cyclophosphamide + 20 μmol·L^-1 hydroxychloroquine phosphate), groupe Bujiale (20 % de sérum médicamenteux Bujiale + 5 μmol·L^-1 cyclophosphamide). Après 48 h de culture, le taux d'apoptose des cellules KGN de chaque groupe a été détecté par cytométrie en flux. L'expression des protéines PI3K, p-Akt, Akt, p-mTOR et mTOR dans chaque groupe a été déterminée par Western blot, ainsi que les protéines liées à l'autophagie telles que Beclin1, ATG5 et LC3. Le degré d'autophagie a été évalué par coloration MDC. Résultats : Le traitement des cellules KGN par 5 μmol·L^-1 cyclophosphamide pendant 48 h a permis de construire un modèle cellulaire POI, inhibant nettement la prolifération des cellules KGN avec une inhibition liée à la concentration. Le sérum médicamenteux Zhuluantang à 20 % et 30 % a favorisé la prolifération cellulaire et atténué l'effet inhibiteur du cyclophosphamide ; les deux concentrations présentaient une efficacité comparable. Par rapport au groupe contrôle, le taux d'apoptose de la groupe modèle était significativement augmenté (P<0,01), les niveaux d'expression des protéines PI3K, p-Akt et p-mTOR étaient significativement réduits (P<0,01), tandis que ceux des protéines Beclin1, LC3 et ATG5 liées à l'autophagie étaient significativement augmentés (P<0,01). Aucun changement significatif n'a été observé dans les niveaux des protéines Akt et mTOR. L'intensité de fluorescence MDC liée à l'autophagie était significativement augmentée (P<0,01). Par rapport au groupe modèle, les taux d'apoptose des groupes contrôle, modèle, sérum médicamenteux, inhibiteur d'autophagie, inhibiteur d'autophagie + sérum médicamenteux et Bujiale ont été significativement réduits (P<0,05, P<0,01), avec le meilleur effet dans le groupe inhibiteur d'autophagie + sérum médicamenteux. Les niveaux d'expression des protéines PI3K, p-Akt et p-mTOR étaient significativement augmentés (P<0,05, P<0,01), particulièrement dans le groupe inhibiteur d'autophagie + sérum médicamenteux (P<0,01). Les niveaux des protéines Beclin1 et ATG5 étaient significativement réduits (P<0,05, P<0,01). Les groupes sérum médicamenteux et Bujiale présentaient une diminution significative de l'expression de la protéine LC3 (P<0,05, P<0,01). Les groupes inhibiteur d'autophagie et inhibiteur d'autophagie + sérum médicamenteux ont montré une baisse de l'expression de LC3, mais sans signification statistique. Conclusion : La décoction Zhuluantang pourrait inhiber l'autophagie excessive via l'activation de la voie PI3K/Akt/mTOR, inversant ainsi les dommages causés au modèle cellulaire KGN par le cyclophosphamide, améliorant la POI.

Décoction Zhuluantang; Insuffisance ovarienne prématurée; Cyclophosphamide; Autophagie