Effet de la formule Bu Shen Hua Tan sur la régulation de la voie de signalisation HIF-1 dans la glycolyse aérobie des cellules MC3T3-E1

XIONG Mengxin ,  

CHEN Yingqing ,  

ZHANG Haoxue ,  

JIANG Zeyu ,  

XIANG Nan ,  

XU Jun ,  

DENG Ali ,  

摘要

Objectif : Étudier l'effet de la formule Bu Shen Hua Tan sur la glycolyse aérobie des cellules ostéoblastes embryonnaires de souris MC3T3-E1 via la voie de signalisation du facteur induit par l'hypoxie-1 (HIF-1), et explorer davantage le mécanisme d'intervention dans l'ostéoporose postménopausique (PMOP). Méthode : Les cellules MC3T3-E1 ont été divisées en groupe contrôle, groupes à faible, moyenne et forte concentration de la formule Bu Shen Hua Tan (0,01, 0,05, 0,1 g/L), et groupe icariine (0,1 g/L). L'activité ostéogénique et la minéralisation des nodules ont été évaluées par coloration de la phosphatase alcaline (ALP) et coloration à l'alizarine rouge (ARS) ; les modifications ultrastructurales des mitochondries et du réticulum endoplasmique rugueux ont été observées par microscopie électronique en transmission ; l'expression des facteurs de transcription liés à l'ostéogenèse Runx2 et Osterix a été détectée par immunofluorescence (IF) ; les niveaux de pyruvate (PA) et de lactate (LA) dans le surnageant cellulaire ont été mesurés par ELISA ; le taux d'acidification extracellulaire (ECAR) a été mesuré à l'aide de l'analyseur Seahorse XF96 ; l'expression des protéines HIF-1α, HIF-1β, PDK1, HK2, PKM2 a été détectée par western blot ; et l'expression des ARNm de HIF-1α, HIF-1β, PDK1, HK2, PKM2 a été quantifiée par PCR en temps réel. Résultats : Par rapport au groupe contrôle, toutes les concentrations ont montré une augmentation significative des zones positives à la coloration ALP et ARS dans les cellules MC3T3-E1 (P<0,05, P<0,01) ; le réticulum endoplasmique rugueux a été significativement dilaté et augmenté en nombre ; le nombre de lysosomes a également augmenté ; l'intensité de fluorescence de Runx2 et Osterix a augmenté significativement (P<0,01) ; les niveaux de PA et LA dans le surnageant cellulaire ont augmenté de manière significative (P<0,01) ; l'ECAR a été significativement augmenté dans les mêmes plages de temps (P<0,05) ; l'expression des protéines et ARNm HIF-1α, HK2, PDK1, PKM2 a été significativement augmentée (P<0,05, P<0,01). Conclusion : La formule Bu Shen Hua Tan peut réguler la glycolyse aérobie des cellules ostéoblastes MC3T3-E1 via l'activation de la voie de signalisation HIF-1, favorisant ainsi la formation osseuse.

关键词

formule Bu Shen Hua Tan; ostéoporose postménopausique; différenciation des ostéoblastes; voie de signalisation du facteur induit par l'hypoxie-1 (HIF-1); glycolyse aérobie

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